[发明专利]禽多核苷酸疫苗制剂

说明书

本发明涉及可接种禽类，尤其是鸡的疫苗制剂，还涉及相应的接种方法。

以前已有人提出过针对与鸡病有关的多种病毒的疫苗。

迄今为止发展起来的方法为灭活疫苗或活疫苗，它们的使用提出了效价和稳定性之间相容性的问题。实际上不论是从所用的不同抗原的角度，还是从制剂本身的角度，都必需确保不同疫苗效价之间的相容性。另外还存在的问题是：这种联合疫苗的保存及其安全性，尤其是存在佐剂时的安全性。这些疫苗一般十分昂贵。

专利申请WO-A-90 11092,WO-A-92 19183,WO-A-94 21797和WO-A-95 20660利用了最近兴起的多核苷酸疫苗技术。已知这些疫苗使用了质粒，所述质粒能在宿主细胞中表达插入其中的抗原。已提出所有的施用途径(腹膜内，静脉内，肌内，经皮，皮内，粘膜等等)。也可以使用不同的接种方式，如将DNA沉积在金粒表面并投射之以穿入动物皮肤(Tang等，自然(Nature),356,152-154,1992)，可以同时转染皮肤，肌肉，脂肪组织和乳房组织的液体喷射注射器(Furth等，分析生物化学(Analytical Biochemistry),205,365-368,1992)。

多核苷酸疫苗也可以使用裸DNA和经配制的DNA，如脂质或阳离子脂质体内的DNA。

因此，本发明打算提供多价的疫苗制剂，所述制剂可以确保接种能抵抗多种病原性的禽病毒。

本发明的另一目的是提供含有不同效价并满足彼此相容性和效价稳定性所需的所有标准的疫苗制剂。

本发明的另一目的是提供可以在相同载体中含有不同效价的疫苗制剂。

本发明的另一目的是提供使用简单且便宜的疫苗。

本发明的另一目的是提供接种鸡形目动物的方法，所述接种可以得到高效，长期以及安全性良好又不留后患的保护作用，包括多价保护作用。

因此，本发明的目的是禽疫苗制剂，所述制剂含有至少3种效价的多核苷酸疫苗，每种含有一个整合质粒，其可在宿主细胞中体内表达一种禽病原体效价的基因，这些效价选自马立克氏病病毒(MDV)，新城疫病毒(NDV),Gumboro病病毒(IBDV)，传染性支气管炎病毒(IBV)，传染性贫血症病毒(CAV)，传染性喉气管炎病毒(ILTV)，脑脊髓炎病毒(AEV或禽白血病病毒ALV)，肺病毒病病毒，和禽瘟病毒，对于每种效价而言，质粒含有一种或多种基因，该基因对于马立克氏病病毒选自gB和gD，对于新城疫病毒选自HN和F，对于Gumboro病病毒选自VP2，对于传染性支气管炎病毒选自S、M和N，对于传染性贫血症病毒选自C+NS1，对于传染性喉气管炎病毒选自gB和gD，对于脑脊髓炎病毒选自env和gag/pro，对于肺病毒病病毒选自F和G，和对于禽瘟病毒选自HA、N和NP。

本发明中的效价应理解成至少一种可提供抗所研究病原体病毒的保护作用的抗原，效价可含有得自一株或多株所研究病原体的一个或多个天然或经修饰的基因作为亚效价。

病原性因子的基因应理解成不仅指完整的基因，也指不同的多种核苷酸序列，包括保持了诱导保护性反应之能力的片段。基因的概念覆盖了等价于实施例中详细描述的序列的核苷酸序列，也就是说，有所不同但编码相同蛋白质的序列。此概念也覆盖了被研究的其它株病原体的核苷酸序列，它可以提供交叉保护作用或特异于株或株群的保护作用。此概念也覆盖了已被修饰以便于由宿主动物在体内表达，但编码相同蛋白质的核苷酸序列。

优选本发明的疫苗制剂含有3种选自马立克氏病、Gumboro病、传染性贫血症和新城疫的效价，也优选在其中加入传染性支气管炎的效价。

在该3,4或5种效价的基础上，可以加入一种或多种选自禽瘟、传染性喉气管炎、肺病毒病和脑脊髓炎的效价。

至于马立克氏病效价，在不同质粒或一个相同质粒中可使用两个编码gB和gD的基因，然而优选仅使用gB基因。

对于新城疫效价而言，优选使用整合至两个不同质粒或一个相同质粒中的HN和F这两个基因。

对于传染性支气管炎的效价而言，优选使用S基因。任选，但较不优选S和M在单个质粒或不同质粒中联合。

对于传染性贫血症的效价而言，优选C和NS1这两个基因在相同的质粒中联合。

对于传染性喉气管炎的效价而言，优选仅使用gB基因。任选，但较不优选gB和gD这两个基因在不同质粒或一个相同质粒中联合。

对于肺病毒病的效价而言，优选使用单个质粒或不同质粒中的F和G这两个基因。