[发明专利]器官移植后慢性排斥反应的检验方法以及尿液组分的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过检测从身体取出的体液，检测在器官移植后开始的慢性排斥反应的方法。具体地讲，本发明涉及通过测定体液中的三氧化氮(NO₃)、基质金属蛋白酶(称作“MMP-2”)或其前体，检测在器官移植后的慢性期出现的排斥(慢性排斥)的方法；本发明还涉及测定尿液中的MMP-2或其前体的方法。

本发明背景

对肾移植患者，通常通过肾活组织检查来诊断慢性排斥反应。然而，患者所经受的定期肾活组织检查有可能使其肾功能受到损害。而且，上述的慢性排斥反应进展缓慢，并伴有不良的主观症状，因此大多的患者拒绝接受痛苦的肾活组织检查。

同时，因为由于慢性排斥反应导致肾功能损害，已有人进行了肾功能检查以给出表明慢性排斥反应进展的指标。在所述检查中，将作为蛋白质通透性升高、反映肾小球异常的尿蛋白、尿白蛋白和运铁蛋白等指标加以测定分析，并将血肌酸酐、血液尿素氮(BUN)、血液β₂-微球蛋白和血液α₁-微球蛋白作为肾小球过滤速率(GFR)下降的指标加以分析测定。然而，在慢性排斥反应的进程中，该检查的测定值变化温和，而当检测到异常测定值时，所述的慢性排斥反应已经产生了晚期症状。到目前为止，还没有任何一种已知的方法能够通过检测体液如尿液和血液中的内源物质来早期检测慢性排斥反应。由于目前还没有简单的检测方法，如得不到适当的治疗，具有慢性排斥不良主观症状的患者将步入晚期，经常导致所述的患者丧失其肾功能。

本发明的目的在于提供一种在器官移植后的早期就能检测到慢性排斥反应的简单方法。

本发明的公开

NO₃和NO₂是NO自由基在生物体内的最终代谢产物。NO自由基是在发生炎症和器官损伤时由有粒白细胞和巨嗜细胞产生的。因此这些代谢产物在发生炎症、由于器官损伤导致的局部缺血性心脏病、休克、移植后的急性排斥和细菌感染期间可临床检测到。然而，还没有有关移植后慢性排斥期间的NO自由基的报道。所以，对进展缓慢的排斥反应是否引起在体内产生NO₃以及体液内的NO₃是否能作为测验慢性排斥的标志进行了研究，并已经发现体液内的NO₃能作为慢性排斥的检测标志。

而且，MMP-2，一种降解组成基底膜的胶原的酶，在组织恢复和再生期间发挥作用。对于癌症，还认为该酶是在癌细胞浸润到基底膜期间降解胶原的酶。经过深入细致的研究，本发明的发明人已经发现MMP-2或其前体从不渗漏到(即使有渗漏的话，也只有痕量的MMP-2或其前体渗漏到)正常个体或肾移植后没有发生慢性排斥反应的患者的体液如尿液中，而在器官移植后发生了慢性排斥的患者的体液如尿液中MMP-2或其前体的量却急剧增高。基于以下发现，即，在器官移植后开始发生慢性排斥反应之后分泌到体液如血液和尿液中的内源物质如NO₃和MMP-2或其前体的浓度显著增高的这一发现，本发明提供了一种通过检测体液如尿液和血液中的内源物质来检测器官移植后的慢性排斥反应的方法；根据该方法使用的测试试剂盒；以及测定尿液中的MMP-2或其前体的方法。

具体地讲，本发明涉及：

(1)一种早期检测在器官移植后发生的慢性排斥反应的方法，该方法对从身体取出的体液进行检测；

(2)一种检测在器官移植后发生的慢性排斥反应的方法，其特征在于检测体液中的三氧化氮(NO₃)、基质金属蛋白酶(MMP-2)或其前体；

(3)上文(2)所述的方法，其特征在于检测体液中的NO₃；

(4)上文(2)所述的方法，其特征在于检测体液中的MMP-2或其前体；

(5)上文(2)、(3)或(4)所述的方法，其中所述的体液包括人尿或血液；

(6)上文(2)所述的方法，其特征在于检测尿样中的MMP-2或其前体；

(7)上文(2)、(3)、(4)、(5)或(6)所述的方法，其中所述的器官移植是肾移植；

(8)上文(6)所述的方法，其特征在于预先设定用于判定在肾移植后是否出现了慢性排斥反应的判定值，基于尿样中的MMP-2前体的浓度，该判定值在0.1-10.0ng/ml的范围内；

(9)上文(8)所述的方法，其特征在于将所述的判定值预先设定在0.5-5.0ng/ml的范围内；