[发明专利]抗CD4和趋化因子受体结构域复合物的抗体及其抵抗HIV感染的应用

权利要求书

1．含CD4趋化因子受体的宿主细胞抗原复合物的抗体的制备方法，包括：

a．使用表达CD4的T细胞作为免疫原，这些T细胞选自下列组中：

ⅰ．选自由外周血单核T细胞，胸腺细胞或脾细胞组成的组的正常T淋巴细胞；或

ⅱ．选自由SUP-T和HPB-ALL组成的组的衍生自T淋巴瘤或白血病的T细胞系细胞；

b．分离并以PBS清洗表达CD4的T细胞；

c．以腹膜内注射方式对动物进行免疫接种，这些动物包括BALB/c小鼠，CD1小鼠，转基因小鼠，大鼠，或恒河猴，这些动物均注射有5-10x10⁶分离且以PBS清洗过的PBS或弗氏完全佐剂中的T细胞，接着每周或每两个月以5-10x10⁶分离且以PBS清洗过的不含佐剂的T细胞进行多次腹膜内强化注射，总共3至6个月，最后一次强化注射是在进行融合以形成杂交瘤之前3天以静脉内方式进行的；

d．测试接受免疫接种动物的血清是否含可与rsCD4结合的抗体；

e．将曾接受免疫接种且其血清在步骤d中呈阳性的动物的脾脏切除以获得脾细胞；

f．将脾细胞与无限增殖恶性细胞系的细胞进行融合以形成杂交瘤，克隆此杂交瘤并筛选能分泌具有下列特性的抗体的杂交瘤：

ⅰ．与rsCD4结合；

ⅱ．在免疫荧光测定中可与表达CD4的细胞结合，其中结合的模式在高分辨率荧光显微镜下呈＂帽状＂；

ⅲ抑制HIVgp120与表达CD4的细胞间的结合；

ⅳ．与已结合了HIVgp120的表达CD4的细胞结合；及

ⅴ．在体外微小空斑测定中于＜10μg/mL的浓度下可中和HIV原代分离物，对50％中和活性而言浓度优选的是在0.01-10μg/mL之间，而对90％中和活性而言浓度优选的是在0.1-35μg/mL之间。

2．如权利要求1所述的方法，其中分泌出的抗体的特点进一步包含

ⅵ．以HIV或SIV原代分离物对灵长类动物或hu-PBL/SCID小鼠进行感染提供被动免疫，其ED₅₀为＜50mg/kg。

3．如权利要求2所述的方法，其中分泌出的抗体的特点进一步包含

ⅶ．与以下肽代表的CD4的4个胞外域中的任一个结合：AA₁-AA₂₀,AA₈₁-AA₉₂,AA₇₉-AA₈₈,AA₆₀-AA₁₀₉,AA₁₁₈-AA₁₆₅,AA₂₃₅-AA₂₅₁,AA₂₉₇-AA₃₅₁，或AA₃₆₁-AA₃₇₅。

4．如权利要求3所述的方法，其中分泌出的抗体的特点进一步包含

ⅷ．优先与rsCD4/趋化因子受体而非rsCD4结合。

5．如权利要求4所述的方法，其中趋化因子受体是CC-CKR5D3肽。

6．如权利要求1、2、3、4或5所述的方法，其中表达CD4的细胞是SUP-T细胞。

7．如权利要求1、2、3、4或5所述的方法，其中表达CD4的细胞是HPB-ALL细胞。

8．如权利要求1、2、3、4或5所述的方法，其中动物是BALB/c或CD1小鼠。

9．如权利要求1、2、3、4或5所述的方法，其中动物是含有编码人类重链及轻链的转基因人类序列的转基因小鼠。

10．以权利要求1所述的方法制备出的抗体，具有以下的特性：

ⅰ．与rsCD4结合；

ⅱ．在免疫荧光测定中可与表达CD4的细胞结合，其中结合的模式在高分辨率荧光显微镜下呈＂帽状＂；

ⅲ抑制HIVgp120与表达CD4的细胞间的结合；

ⅳ．与已结合了HIV-1gp120的表达CD4的细胞结合；及

ⅴ．在体外微小空斑测定中于＜10μg/mL的浓度下可中和HIV原代分离物，对50％中和活性而言浓度优选的是在0.01-10μg/mL之间，而对90％中和活性而言浓度优选的是在0.1-35μg/mL之间。