[发明专利]交叉保护性马疱疹病毒制品及其制备和使用方法

说明书

本发明涉及一种马疱疹病毒制品，该制品能对由1型马疱疹病毒引起的流产和呼吸疾病以及由4型马疱疹病毒引起的呼吸疾病提供保护作用。更为具体地说，本发明涉及一种有效的疫苗及其制备和使用方法。

                              发明背景

马的流产和马鼻肺炎是由于1型马疱疹病毒(EHV-1)和2型马疱疹病毒引起的常见病。目前由于已确定2型马疱疹病毒的分子结构与EHV-1存在显著性差别而将其命名为EHV-4。EHV-1是造成呼吸疾病的主要原因。由于幼马的各种亚型的EHV而引起了呼吸疾病，其结果使这些马参于竞争的能力丧失或受到削弱，从而造成了经济上的损失。怀孕母马的感染所造成的经济损失的原因在于其流产。中枢神经系统综合征也与EHV-1有关，这种疾病的发展是由逐步的瘫痪变为完全瘫痪，而且在某些情况下导致死亡。

由于EHV-1和EHV-4之间缺乏同源性，因此有人提议只有含有EHV-1和EHV-4亚型的马疱疹病毒疫苗才可防止流产和各类呼吸疾病。事实上，美国专利4,083,958描述了一种仅对由EHV-1引起的流产和呼吸疾病有保护作用的马疱疹病毒疫苗。它没有声明对由EHV-4引起的呼吸疾病具有保护作用。美国专利5,084,271报导，如果使马驹接受EHV-1，不管该EHV-1是活的还是被灭活的，都会产生一种仅对EHV-1有反应的抗体。如果使马驹接受EHV-4，则对EHV-1和EHV-4都产生血清应答。但是，它没有表明对于攻击具有实际上的保护作用。后者的专利要求一种有效的疫苗必须是单独含有EHV-4或同时含有EHV-1和EHV-4。因此，可以预期单价的EHV-1疫苗对于EHV-1和EHV-4呼吸综合症以及由EHV-1引起的流产没有保护作用。

                             发明概述

本发明包括一种被命名为AB69的亚型1马疱疹病毒(EHV-1)株或它的等效株，该株可用于制备能诱导产生对EHV-1和EHV-4具有保护性免疫反应的抗原。本发明还包括制备一种含有AB69的单价疫苗，该疫苗可用于对年幼的马驹、成年马或怀孕母马进行接种以提供对由于EHV-1或EHV-4引起的呼吸疾病的保护作用，以及提供对由于EHV-1引起的流产的保护作用。

本发明进一步包括一种制备和使用该制品对马进行保护的方法。可以预想本发明的疫苗制品还能提供对由EHV-1引起的中枢神经系统疾病的保护作用。

在本发明实施方式中，本发明包括制备这种单价EHV-1疫苗的方法，该方法通过下列步骤进行：在连续的细胞培养物上繁殖AB69株或其等效株、收集并通过除去病毒上清中的细胞碎片而进行纯化、浓缩、化学方法灭活和使用佐剂，下文对此进行更为全面地描述。

                              发明详述

如上所述，本发明涉及一种EHV-1病毒，如果将这种病毒制成某种制品如疫苗并用它对马进行非肠道给药，则会给所有马提供对与EHV-1和EHV-4有关的疾病的保护作用。更为具体地说，所公开的EHV-1疫苗保护怀孕母马免于由EHV-1引起的流产，保护马免于由EHV-1或EHV-4引起的呼吸疾病，并且降低由EHV-1引起的中枢神经系统疾病的发病率。用于制备这种疫苗的EHV-1病毒株是在攻击研究过程中从被感染的流产胎的肺组织分离出来的。已将命名为AB69的该分离物保藏于ATCC，保藏号为＿＿。使该病毒在马的皮肤细胞系上传代两次而建立一种主接种物。该病毒可在允许其复制到足够水平的敏感细胞系中生长，以提供免疫致敏足够的抗原物质，从而产生对EHV-1和EHV-4的保护作用。以下对复制病毒及以其制备疫苗的方法进行非限制性地和例证性地描述。