[发明专利]牛疱疹病毒1型亚单位疫苗的基于含水溶剂的胶囊化

说明书

本发明涉及微胶囊化的疫苗。更具体地说，本发明涉及新的微胶囊，其具有胶囊化含水的或实质上含水的核的各向异性路易斯盐膜以及被该盐膜包裹的免疫原性组合物。所说的微胶囊通过含水介质中路易斯酸和碱壁-形成反应物的界面反应制备。更具体地说，本发明涉及如此胶囊化的牛疱疹病毒-1(BHV-1)的亚单位组分。

微胶囊化是一种可以将比较薄的包衣运用于固体小微粒悬液或液体小滴的方法，其提供将液体转化成固体，改变胶体和表面性质，提供环境保护，并且控制所包覆的材料的释放特征或可利用度的一种手段。一些这样的性质可以用微包装技术达到；然而，微胶囊化作用的独特性在于所包覆微粒最小性和它们尔后的用途以及地各种剂量形式与产物应用的适应性。因此，在工业规模上用于产生微胶囊的已知的可行的方法经常包括利用有机溶剂。然而，对有机溶剂的利用可能存在环境和安全问题。此外，经常困难的是从微胶囊除去所有有机溶剂以去掉有机污染物。

已经提出了利用微胶囊作为传送疫苗的一种手段。已研究了两种广泛类型的抗原送递系统提高免疫性的能力：固体(或)多孔微胶囊和具有由物理上明显的壁包裹的核心区的微胶囊。固体微胶囊可以由各种方法制备，包括胶体凝聚(Kwok，K.K.等，1991，药物研究.8：341-344)，物理方法(例如，物理分离)(Santiago，N.等，1993，药学研究.10：1243-1247)，或化学试剂(例如，酸氯化物)(Levy，M.C.等，1991，药学会杂志80：578-585.)，或用聚酯薄膜包裹含水分散体的溶剂蒸发技术(Singh，M.等，1991，药学研究。8：958-961)沉淀蛋白质。表现出对抗原送递有用的壁/核系统包括脂质体(Gerlier，D.等，1983，免疫学杂志.131：490)，ISCOMS(Claassen，I.，和Osterhaus，A.，1992，免疫学研究.143：531-541)和蛋白体(Gould-Fogerite，S.，和Mannino，R.，1992，脂质体技术，Vol.III，Gregoriadis，G.(编者)，CRC出版社，Boca Raton，FL.；Miller，M.D.等，1992，J..Exp.Med.176：1739-1744)。

或许充分研究的抗原送递系统是来源于乳酸和乙醇酸的线型聚合酯(即聚(DL-环二酯-共-glycol ide))(PLCG)的哪些(Edelman，R.等，1993，疫苗11：-155-158；Eldridge，J.H.等，1989，Curr.Top.微生物学免疫学.146：59-66；Eldridge，J.H.等，1990，控制释放杂志11：205-214；Eldridge，J.H.等，1989，Adv.Exp.Med.Biol.251：191-202；Eldridge，J.H.等，1991，分子免疫学28：287-294；Eldridge，J.H.等，1991，感染免疫学.59：2978-2986；Marx，P.A.等，1993，科学260：1323-1327；Moldoveanu，Z.等，1993，传染病学杂志.167：84-90；O′Hagan，D.T.等，1993，疫苗11：149-154；O′Hagan，D.T.等，1991，免疫学73：239-242；Ray，R.等，1993，传染病学杂志.167：752-755；Reid，R.等，1993，免疫学杂志.150：323A；Reid，R.H.等，1993，疫苗，11：159-167)。推定的抗原胶囊化进PLCG微胶囊提供一些益处。首先，微胶囊容易由水解降解形成乳酸和乙醇酸。第二，大小不到51μm的PLCG微胶囊在小鼠口头接种之后容易穿透Peyer′s片，肠系膜淋巴结以及脾。第三，用PLCG微胶囊化的抗原(包括流感病毒，副流感病毒，猿免疫缺损病毒，金黄色葡萄球菌肠毒素B类毒素以及卵白蛋白)口头，腹膜内，鼻内或皮下接种小鼠诱导出较在用相同剂量的病毒或蛋白质接种的动物中所诱导的免疫反应更强的免疫反应。此外，用灭活的病毒口头接种小鼠在粘膜表面诱导增强的抗原-特异性IgA反应。最后，PLCG微胶囊已口头施用于成年志愿者，没有副作用。

PLCG微胶囊的主要缺点是需要使用有机溶剂。与有机溶剂的接触将灭活病毒和细菌病原体的感染性，此外，其可以改变对诱导体液或细胞免疫反应关键的表面蛋白质的免疫原性。事实上，大量的病毒蛋白质对用PLCG微胶囊诱导抗原-特异性免疫反应是需要的。