[发明专利]从转基因非人动物中纯化高级转录复合物

说明书

本发明涉及含有编码已附加表位的TATA框结合蛋白(TBP)的DNA的转基因、产生表达已附加表位的TBP的转基因动物和使用它们从各种类型的真核组织和细胞亲和纯化(新的)转录因子和转录复合物。

对真核转录过程的调节重要的是前起始复合物的逐步形成和活性。此复合物是一种大的多亚基复合物，对于RNA聚合酶II酶在转录起始点的正确定位和起始是必需的。在最近几年，从真核生物的核中鉴定了这种复合物的许多一般转录因子(GTFs)，包括TFIIA、TFIIB、TFIID、TFIIE、TFIIF和TFIIH(Zawel和Reinberg(1995)生物化学年度综述64，533-561；Serizawa等(1994)，“转录：机制和调节”，45-66，Raven出版社)。在含有TATA的启动子中，TFIID和TATA框序列具有特异性的亲和性。正是通过这种序列识别出TFIID是在基础RNA聚合酶II转录中结合启动子的首要因素，因此是形成复合物的核心(Lewin，B.(1990)细胞.61：1161-1164)。其它的GTFs以确定的逐步的方式结合，产生了整个前起始复合物。其后，这种大的复合物在转录起始点征集并且使RNA聚合酶II(Pol II)正确定位以开始基础转录。因此，可以看出本身为多亚基复合物的TFIID在调节″活化的转录″中起关键作用，也可以说成在转录激活物的存在下mRNA的产生水平提高了。这样的激活物可以是天然存在的结合增强子的决定簇(如结合E框的USF(Sawadogo和Roeder(1985)细胞43：165-175；Kirschbaum等(1992)分子细胞生物学12：5094-5100))或病毒因子(例如VP16(Stringer等(1990)自然345：783-786))。

TFIID是由结合TATA的蛋白质(TBP)和一些TBP相关性因子(TAF₁₁s)(在本申请中″TAF₁₁s”包括任何种类的转录因子、转录激活物、转录抑制剂)组成的。到目前为止已经鉴定了多达20种不同的TAF₁₁s，同时观察到了含有TAF₁₁s不同组合的TFIID复合物(Zawel和Reinberg(1995)生物化学年度综述64：533-561；Hori，R.和Carey，M.(1994)当代遗传学的最新发展4：236-244)。此外，TAF₁₁s的不同组合导致了TFIID复合物不同的性质。例如，在果蝇属中，模式形成蛋白质Hunchback(HB)和Bicoid(BCD)完全依靠TFIID复合物中的TAF₁₁60、TAF₁₁110和TAF₁₁250的存在(Sauer，F.等(1995)科学270，1783-1788)。这些TFIID组分作为上游结合增强子的HB和BCD蛋白质的共激活物。已经表明神经原因子NTF-1需要TBP、TAF₁₁150(NTF-1与之结合)和TAF₁₁250的最小复合物来激活转录，而SP1需要附加的因子TAF₁₁110来激活(Chen，J.-L.等(1994)细胞79：93-105)。另一个研究确定了TAF₁₁28，它的存在对于转录激活(通过雌激素与维生素D3核受体)是必需的(May，M.等(1996)EMBO 15.3093-3104)。很可能TAF₁₁s作为转录衔接子通过蛋白质-蛋白质相互作用从活化剂/阻遏物因子向核心起始复合物传递调节信息。