[发明专利]一种新的人基因编码序列、其编码的多肽及制备方法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人HSLARP的cDNA序列，该蛋白是Septin的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

Septin家族成员广泛存在于真菌、果蝇、哺乳动物以及植物等各种真核生物细胞中，是细胞骨架中除微管蛋白、肌动蛋白外的又一重要组成部分，普遍参与胞质分裂作用。研究表明，septin蛋白异常的酵母细胞无法进行胞质分裂，最终形成具有出芽生长不正常的多核细胞(Bacteriol.Rev.38：164-198，1971)。这种参与细胞生长的重要作用也由该家族蛋白在各种生物中保守的序列和功能所证明(Cell 84：187-190，1996)。Septin家族四个的成员CDC3、CDC10、CDC11、CDC12最早由Hartwell等人于1971年从出芽酵母中分离得到，编码这四个蛋白的基因于1989年由Pringle等人克隆到(Method Cell Biology 31：357-435，1989)。1994年以后，人们在果蝇中找到了三个septin家族的基因：pnut、sep1、sep2(Journal of CellBiology 133：605-616，1996)。至今，至少有五个哺乳类septin基因被发现：鼠的diff6、nedd5(Biochem.Biophys.，Res.Commun.185：1155-1161，1992)和h5(TrendsNeurosci 15：319-323，1992)，人的hCDC10(Biochem.Biophys.，Res.Commun 202：82-87，1994)和KIAA0518(DNA Res.2：167-174，1995)。在本发明被公布之前，尚没有任何人公开过本申请中涉及的另一个人类septin家族成员Hslarp。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码septin家族的一个新成员，本发明的septin家族被命名为HSLARP。

本发明的另一个目的是提供一种新的人的septin家族成员，该蛋白被命名为HSLARP。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人的septin家族成员的方法。

本发明还提供了这种人的septin家族成员基因序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人HSLARP蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸21-1121位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸21-1121位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.3中从核苷酸21-1121位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的HSLARP蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有HSLARP蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有HSLARP蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成HSLARP蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸21-1121位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成HSLARP蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达HSLARP蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有HSLARP蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为1177个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.3，其中开放读框位于21-1121位核苷酸。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。