[发明专利]人HSDHML编码序列、其编码的多肽及制备方法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人HSDHML的cDNA序列，该蛋白是鼠Dhm1的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

Dhm1、dhp1、RAT1和SEP1是小鼠及酵母中发现的几个基因，它们被认为与同源重组和RNA加工有关。同源重组是所有真核和原核生中都存在的一个普遍现象。尤其是在真核生物中的配子发生过程中，同源重组是一个关键的步骤。RNA加工则对于蛋白的合成有重要作用。在本发明中，HSDHML基因与小鼠的Dhm1高度同源，同时与dhp1、RAT1、SEP1的同源性也较高，因而我们认为它是Dhm1在人中的一个同源基因，并且与Dhm1(以及dhp1、RAT1、Sep1)有着相似的生物学功能，这些功能包括RNA的加工代谢、同源重组、配子发生、微管联系核融合、端粒保持以及细胞衰老等方面。

Dhm1是小鼠中发现的一个基因。它是由日本东京大学Shobuike T等人于1995年从小鼠精母细胞cDNA文库中克隆得到的一个基因(Nucleic Acid Reserch，1995，23(3)，357-361)，它与酵母中的基因dhp1，RAT1和SEP1具有较高的同源性并具有相似的功能。SEP1是于1991年由Tishkoff DX等人从栗酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)克隆的(Mol Cell Biol，1991，11，2593-2608)。其后不久，Amberg DC等运用遗传学和组织化学的方法研究酿酒酵母(Schizosaccharomyces cerebisiae)中与RNA运输有关的基因时发现了RAT1基因，该基因的编码产物具有与SEP1较高同源性的区段，并被证实具有5’外切核酸酶和催化DNA链交换的活性(Genes Dev 1992，6(7)，1173-1189)。dhp1则是Sugano S等在低严谨条件下以DST2(＝SEP1)的PstI-HindIII酶切片段为探针从S.pombe找到的SEP1的一个同源基因(Mol Gen Genet，1994，243，1-8)。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人的一种与小鼠DHM1同源的蛋白，本发明的人的小鼠DHM1同源基因被命名为HSDHML(GenBank Accession No.AF064257)。因申请保密一段时期，所以在本申请之前该登录的序列未对公众公开。

本发明的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为HSDHML。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人HSDHML蛋白的方法。

本发明还提供了这种人HSDHML基因序列和蛋白的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人HSDHML蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.5中从核苷酸69-2921位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.5中从核苷酸69-2921位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.6所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.5中69-2921位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的HSDHML蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.6氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.6序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有HSDHML蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有HSDHML蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成HSDHML蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.5中从核苷酸69-2921位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成HSDHML蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达HSDHML蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有HSDHML蛋白活性的多肽。