[发明专利]转人实体瘤内皮抑制因子基因双歧杆菌的方法

权利要求书

1．一种转人实体瘤内皮抑制因子(Endostatin)基因双歧杆菌(Bifidobacteria)方法，其特征是以含有人Endostatin基因的pBV220这种具有温控原核表达元件的质粒作为转化载体，以人源双歧杆菌为受体，采用溶菌处理的PEG法和氯化钙法转化方法处理，再经继代选择性培养得到转基因双歧杆菌。

2．根据权利要求1所述的方法，其特征是它包括以下步骤：

a．把专利申请号为97107112．8中人Endostatin基因经酶切转移到具有温控原核表达元件的pBV220质粒中，经扩增提取和纯化，制得所需的质粒载体；

b．将作为受体的双歧杆菌厌氧培养到对数生长期，然后用1mg／ml-3mg／ml的溶菌酶37℃处理0．5-3小时，制得便于接受外源基因的双歧杆菌受体；

c．采用适合于原核表达元件的质粒常规转化方法--PEG法和氯化钙法，用含Endostatin基因的pBV220质粒对双歧杆菌受体进行转化处理；

d．经上述转化处理的双歧杆菌经涂布于含有青霉素的常规培养基平板上抽真空后充氮气厌氧培养48-72小时，然后挑取单菌落培养于常规培养液中扩增培养，再如此重复接种至继代培养不低于15代。