[发明专利]使用细胞系来制备传染性囊病病毒及禽呼肠病毒的方法

说明书

本发明涉及一种使用细胞系制备传染性囊(bursal)病病毒(IBDV)和禽呼肠病毒(ARV)的方法。更具体地讲，本发明涉及一种用于制备IBDV和ARV的方法，该方法包括用IBDV或ARV感染细胞系，培养所说的受到感染的细胞系以便增殖IBDV或ARV以及从所说的受病毒感染的细胞中回收IBDV或ARV。对IBDV而言，上述细胞系为那些从禽类得到的细胞系，而对ARV而言为从禽类或者哺乳动物中得到的细胞系。本发明还涉及传染性囊病和禽呼肠病毒传染病的疫苗以及用所说的疫苗预防传染性囊病和禽呼肠病毒传染病的方法，而所说的疫苗包括作为主要成分的由所说的方法获得的IBDV或ARV抗原。

传染性囊病为一种由传染性囊病病毒(下文也称作“IBDV”)引起的鸡急性传染病。传染性囊病为一种病毒疾病，该病的主要症状为包括法氏囊在内的淋巴组织发生坏死。当感染鸡时，IBDV抑制宿主的免疫应答，从而通过疫苗免疫作用的减小或者宿主抵抗力的降低而造成诱发并加剧了由机会性感染引起的多种疾病。针对IBDV，已经鉴定出两种血清型(血清型1和2)。尽管血清型1和2都感染鸡，但是血清型1的病毒诱导传染性囊病的发作。

禽呼肠病毒(下文也称作“ARV”)为一种由于腱鞘炎、腹泻或者生长迟缓引起腿虚弱的传染病。ARVs广泛分布于鸡中并且被分成许多的血清型。每种血清型都表现出不同的致病性，并且疾病的严重性在很大程度上受到上述多种致病性、感染的程度和途径或者鸡的年龄和免疫力的影响。IBDV或ARV对鸡的感染将造成很大的经济损失。

迄今为止，为了预防各种IBDV或ARV的感染，已经研制出了几种疫苗并且可以通过商业途径得到它们。通过把IBDV接种到鸡中以使上述病毒在法氏囊中增殖、通过把IBDV接种到正在形成胚胎的蛋中以使上述病毒在绒毛膜尿囊的膜、胚胎或者尿囊中增殖、通过在鸡胚成纤维细胞(CEF)中培养上述病毒以及类似的方法(家禽疾病，第8版，566-576，1984)已经生产出用于制备传染性囊病疫苗的抗原物质。例如通过用ARV感染CEF以便增殖所说的病毒并从中回收该病毒，已经生产出用于制备ARV传染病疫苗的抗原物质(T.Uchimura，日本家禽疾病协会杂志，第26卷，26-30，1990)。

但是，如上所述的常规方法因其耗费体力和时间而有不足之处，这表现在以下方面：当使用鸡时，需要孵化许多的鸡并从这些鸡中无菌地取出法氏囊；在蛋的生产中，当使用正在形成胚胎的蛋时，需要孵化这些蛋并从正在形成胚胎的蛋中无菌地取出绒毛膜尿囊的膜、鸡的胚胎或者尿囊液；或者当使用CEFs时，从正在形成胚胎的蛋中得到鸡的胚胎，切割该胚胎并用酶法进行处理以便得到CEFs。另外在这些方法中，由于在生产疫苗时使用了不同的起始培养细胞或组织，所以也不容易保持疫苗质量的稳定。

反之，使用用于感染并增殖病毒的细胞系以便从受感染的细胞中获得用于生产疫苗的病毒抗原将会使用于生产病毒的起始物质的制备更加容易，提高了生产率并且可以保持疫苗质量的稳定。

迄今为止，已经报道了许多从哺乳动物或禽类得到的细胞系(Witter R.L.与禽类病理学委员会，8，487-498，1979)，其中包括例如从仓鼠的肺中得到的HmLu-1细胞(H.Okumura，培养物中的癌细胞，292-298，1968)，从仓鼠的肾中得到的BHK-21细胞(LAN Macpherson和Michael Stoker，病毒学，16：147-151，1962)，Vero细胞、即一种类人猿的细胞系(Y.Yasumura，A.Kawayoshi，Nippon Rinsho，第21卷，第6期，1201-1219，1963)，从鸡的成淋巴细胞中得到的细胞系(Akiyama和Kato，BikenJ.，17：105-116，1974)，用劳斯肉瘤病毒或致癌物处理的鸡成纤维细胞(Kaaden等人，In Vitro，18：827-834，1982；H.Ogura等人，Gann.，75：410-414，1984；Dinowitz M.，国家癌症研究院杂志，58：307-312，1977；Lerman等人，国家癌症研究院杂志，57：295-301，1976)，用亚硝基胍处理的鸡胚成纤维细胞CHCC-OU2细胞(H.Ogura等人，Acta Med Okayama，41(3)141-143，1987)，从用致癌物处理的特有的鸡上皮肝细胞癌中得到的LMH细胞(Kawaguchi等人，癌症研究，47：4460-4464，1987)以及类似的细胞。