[发明专利]新的酯酶和产生光活性苯并二氢吡喃化合物的方法

权利要求书

1．一种新的酯酶，该酯酶具有下列物理化学性质；

(1)酶活性

该酶在水解酯化合物成为羧基和醇中以及在酯化合物与醇之间的酯交换反应中充当催化剂；

(2)底物特异性

该酶主要水解6-氨基苯并二氢吡喃-3-乙酸酯的(R)型；

对于直链脂肪酸和对-硝基苯酚的酯，脂肪酸中碳原子的数量越少，水解活性越强；

(3)分子量

该酶的分子量是50000±2000(SDS-PAGE)；

(4)最适pH

水解最适发生在pH7-10；

(5)最适温度

水解最适发生在55℃到60℃；

(6)温度稳定性

在pH7.2，温度在60℃以下，90％的水解活性可以保持30分钟；

(7)pH稳定性

该酶在pH5-10的范围内稳定；

(8)抑制剂

30℃下在0.1M磷酸缓冲液(pH7.2)中用不同的抑制剂处理30分钟时，用硫酸铜(1mM)该酶失去30％的活性，用苯甲基磺酰氟(0.1mM)失去85％，用二异丙基氟磷酸(0.5mM)失去15％。用月桂基硫酸钠(5mM)或脱氧胆酸钠(5mM)没有观察到该酶活性的降低。

2．一种产生权利要求1的酯酶的方法，其中培养产生权利要求1的酯酶的假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)的微生物，并且从最终的培养物中分离出所说的酯酶。

3．如权利要求2所要求的方法，其中所说的假诺卡氏菌属的微生物是嗜热假诺卡氏菌(Pseudonocardia thermophila)FERM-BP-6275。

4．一种用于光学拆分(R)-酯化合物和(S)-酯化合物的混合物的方法，该方法包括以下步骤

(a)在反应介质中，将权利要求1描述的酯酶与(R)-酯化合物和(S)-酯化合物的混合物接触，以便通过立体有择水解(R)-酯化合物和(S)-酯化合物之一，得到一种光学活性酸化合物；

(b)从反应介质中回收光活性酸化合物或没有水解和保持的光活性酯。

5．如权利要求4所要求的方法，其中所说的酯酶是选自下组的一种形式：分离的和纯化的酶、粗制酶制剂、具有酯酶的微生物细胞、所说微生物的培养物上清液、所说微生物的细胞碎片、所说微生物细胞的抽提物、以及固定化酯酶或具有所说酯酶的微生物的细胞。

6．如权利要求4或5所要求的方法，其中所说的酯化合物是式(Ⅰ)的苯并二氢吡喃化合物：

其中R₁是一个具有1-5个碳原子的直链或支链烷基，并且R₂是一个氢原子或一个取代的或未取代的氨基。

7．一种用于产生光活性苯并二氢吡喃-3-乙酸或光活性酯的方法，该方法包括以下步骤：

(a)在反应介质中，将式(Ⅰ)的(3R)-和(3S)-苯并二氢吡喃-3-乙酸酯的混合物与一种具有旋光选择性的水解活性的酯水解酶接触，以获得一种光活性苯并二氢吡喃-3-乙酸化合物：

其中R₁是一个具有1-5个碳原子的直链或支链烷基，并且R₂是一个氢原子或一个取代的或未取代的氨基，并且

(b)从反应介质中回收光活性苯并二氢吡喃-3-乙酸化合物或没有水解和保持的活性的光活性酯。

8．如权利要求7所要求的方法，其中酯水解酶是选自下组的一种形式：分离的和纯化的酶、粗制酶制剂、具有酯酶的微生物细胞、所说微生物的培养物上清液、所说微生物的细胞碎片、所说微生物细胞的抽提物、以及固定化酯酶或具有所说酯酶的微生物细胞。

9．如权利要求8所要求的方法，其中所说微生物是选自下组的微生物：假诺卡氏菌属、黄杆菌属(Flavobacterium)和高温放线菌属(Thermoactinomyces)。

10．如权利要求9所要求的方法，其中所说微生物是选自下组的微生物：嗜热假诺卡氏菌FERM-BP-6276，海床黄杆菌(Flavobacterium okeanokoites)FERM-BP-6276和糖高温放线菌(Thermoactinomyces sacchari)ATCC-27375。