[发明专利]新的人核受体协阻抑物编码序列、其编码的多肽及制法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人HNRCR的cDNA序列，该蛋白是核受体协阻抑物(nuclear receptor coreceptor，简称NRCR)的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

核受体协阻抑物是一种能和核受体共同作用，调节靶基因转录的蛋白分子。类固醇、类视黄醇、甲状腺素能够通过对细胞内相应的受体调节，开启特异基因的表达。这些激素的受体组成了一个称作核调节蛋白的超家族，其成员都是具有高度特异性和选择性的，依赖于配体作用的转录因子。这些受体结合于基因的上游调控区，当它们未和相应配体结合时，能通过和核受体协阻抑物的作用，抑制这些基因的表达(Gene Dev.11：835-846，1997)。

1995年Howard Hughes医学院的Horlein等人用结合分析法率先从CV-1细胞中分离得到一个分子量为270kD的人核受体协阻抑物蛋白(N-CoR)。他们的方法是将CV-1全细胞的抽提物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移至硝纤膜上，用³²P标记甲状腺素受体C末端与之进行杂交。随后他们又用酵母双杂交法获得了编码该蛋白的部分cDNA顺序，并且在鼠的垂体cDNA库中筛选到了该cDNA的全长序列(Nature377：397-404，1995)。同年，该医学院的Chen等人用相似的方法得到了另一个转录协阻抑物——类视黄醇和甲状腺素受体沉默中介体(silencing mediator for retinoidand thyroid hormone receptor，SMRT)的cDNA全长序列(Nature 377：454-457，1995)。近年来又有一些270kD核受体协阻抑物蛋白的不同剪切的形式的产物被报道发现(Mol.Endocrinol.10(12)：1646-1655，1996)。1997年，Zamir等人克隆了一个和已知N-CoR、SMRT无同源关系的协阻抑物SUN-CoR(P.A.N.S.94：14400-14405，1997)。

在本发明之前，尚没有任何人公开过本申请中涉及的另一种人类核受体协阻抑物成员HNRCR。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人的核受体协阻抑物同源蛋白，本发明的核受体协阻抑物同源基因被命名为HNRCR。

本发明的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为HNRCR蛋白。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人HNRCR蛋白的方法。

本发明还提供了这种人HNRCR编码序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人HNRCR蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.20所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的HNRCR蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.20氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.20序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有HNRCR蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有HNRCR蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成HNRCR蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.19中从核苷酸75-7106位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成HNRCR蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达HNRCR蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有HNRCR蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为7900个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.19，其中开放读框位于75-7106位核苷酸。