[发明专利]一种谷氨酰胺发酵生产工艺

权利要求书

1．一种谷氨酰胺发酵生产工艺，其步骤顺序如下：

(1)发酵菌株的选择：黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)、钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)之一；

(2)母斜面制备：将上述发酵菌株接种斜面，29-37℃恒温培养8-20小时，制得母斜面，母斜面冷藏待用；

(3)子斜面：将步骤(2)得到的母斜面接种子斜面，培养方法同步骤(2)；

(4)一级种子培养：将步骤(3)得到的斜面菌苔接种于已灭菌的装有种子培养基的摇瓶中，在29-37℃下摇床培养8-20小时；

(5)二级种子培养：将步骤(4)培养好的一级种子按2％-10％(体积比)接种于已灭菌的装有种子培养基的种子罐开始培养；培养条件：通气量0.5-1.5VVM，罐压0.01-0.05Mpa，温度29-37℃，溶解氧3％-80％饱和度；培养时间6-18小时；

(6)发酵罐发酵：将步骤(5)培养好的种子按2％-10％(体积比)接种于已灭菌的装有发酵培养基的发酵罐中开始发酵，控制条件为：温度29-37℃，通气量0.5-1.5VVM，罐压0.01-0.05MPa，溶解氧0.5％-90％饱和度，pH6.5-7.5，并以消泡剂消泡；发酵8-24小时，补入发酵初始培养基0.5-1.5％(重量体积比)的氯化钾；发酵14-26小时，停止pH控制，使pH自然降低至6.2-6.6，之后控制pH在此范围内，溶解氧在20-80％饱和度之间，并连续流加30-80％(重量体积比)的糖溶液，或者将糖溶液按每次每升发酵液10-30 克糖分批补入，控制发酵罐中糖浓度在5-40g/L之间；补加氯化钾之后，每间隔8-24小时补入发酵液总体积0.05％-0.3％(体积比)的玉米浆；发酵50-68小时停止补糖，待糖浓度降低至1-10g/L时发酵结束。

2．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(1)中所述的黄色短杆菌是黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)ATCC14067、AS1.495、AS 1.582之一，谷氨酸棒杆菌是指谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)ATCC13286、ATCC 14751、ATCC 14752、ATCC 13032、AS1.805、ACCC 11067、ACCC 11063、IFFI 10056、IFFI 10054、IFFI10131、IFFI 10039、IFFI 10031、IFFI 10051、IFFI 10052、IFFI 10111之一，北京棒杆菌是指北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)AS 1.299，钝齿棒杆菌是指钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS 1.452。

3．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(2)中保存菌株的时间不超过一个月。

4．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中溶解氧的控制通过调整搅拌转速、通气量、罐压实现。

5．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中pH通过补入浓度为10％-30％(重量体积比)的氨水调节。

6．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中消泡剂是聚醚类或硅酮类消泡剂。

7．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中玉米浆是浓玉米浆或稀玉米浆，浓玉米浆干物质含量为50％-90％(重量比)，稀玉米浆干物质含量为5％-50％(重量比)。

8．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中稀玉米浆的补入量占发酵液总体积的0.10％-0.30％(体积比)；浓玉米浆补入量占发酵液总体积的0.05％-0.15％(体积比)。

9．如权利要求1所述的谷氨酰胺发酵生产工艺，其特征在于，步骤(6)中糖溶液是指葡萄糖溶液。