[发明专利]一种新的人蛋白及其编码序列,及制法和用途

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人nek4的cDNA序列，该蛋白是鼠nek1和人nek蛋白的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

NIMA、nek1是分别从真菌及小鼠中发现的两个基因，属于调控细胞周期的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族中的二个成员，它们被认为与调节细胞分裂周期活动有关。细胞分裂周期是生物界普遍存在的生命现象，是高等生物细胞增殖及生长的重要过程。细胞分裂周期由多种细胞周期蛋白共同调节完成，而这些细胞周期蛋白又是在依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶的调节作用下发挥正常的调节功能的。

调控细胞周期的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在各种不同的细胞类型与种群中都广泛存在，且具有高度的保守性，从真菌到小鼠及人类均含有这种蛋白。人们最早是从构巢曲霉(Aspergillus.nidulans)中发现并克隆得到了NIMA基因(J Cell.Biol 96，1155-1158，1983)；随后，Kenneth Letwin等人于1992年从小鼠中分离得到了nek1基因(EMBOJ.1992，11(10)，3521-3531)。Sharo J.等人于1994年分离得到了人nek1、nek2及nek3基因(Cell Growth & Differ.1994，5，625-635)。研究发现，这些基因在结构与功能上都是高度保守的(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998，95：114-119)。

然而，在本发明之前，没有公开过本发明的这种新的蛋白或其编码序列。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人的一种与小鼠nek1同源的蛋白，本发明的人的与小鼠nek1同源基因被命名为人nek4。

本发明的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为人nek4蛋白。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人nek4蛋白的方法。

本发明还提供了这种人nek4核酸序列和蛋白多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人nek4蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.5中从核苷酸78-1019位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.5中从核苷酸78-1019位的核苷酸杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.6所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.5中78-1019位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的人nek4蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.6氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.6序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有人nek4蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有人nek4蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人nek4蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.5中从核苷酸78-1019位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人nek4蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达人nek4蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有人nek4蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为1189个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.5，其中开放读框位于78-1019位核苷酸。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。