[发明专利]新的人磷脂翻转酶、其编码序列及制法和用途

说明书

本发明涉及基因工程领域。具体地本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。本发明的多肽被推断鉴定为一种新的人磷脂翻转酶。

细胞质膜上的磷脂的分布通常是不对称的，磷脂酰胆碱和神经鞘磷脂一般分布在双层膜的外侧，而氨基磷脂、磷脂酰丝氨酸和磷脂酸乙氨醇局限于细胞质一侧(Schrait A.J.et al Biochim.Biophys.Acta 1071：313-329，1991)。磷脂分子在质膜中一般很少发生翻转运动(flip-flop)，但细胞活化、细胞损伤、细胞凋亡等生理活动导致的细胞内Ca²⁺水平上升可以引发质膜中磷脂分子的双向移动(WilliamsonP.et al Biochemistry 31：6355-6360，1992)。磷脂分子在膜两侧的翻转运动能促进凝血系统、补体系统中关键酶的聚集和活化，并加速损伤细胞和凋亡细胞的清除(Bevers E.M.et al Blood Rev.5：146-154，1991)。

磷脂翻转酶(phospholipid scramblase，简称为“PLS”)是近年来新发现的能介导Ca²⁺依赖型磷脂分子翻转运动的一个蛋白质。1996年，Basse等人从人的红细胞中分离得到了一个约37KD的膜整合蛋白，该蛋白具有介导人工脂质体磷脂分子翻转的功能(Basse F.et al J.Biol.Chem.271(29)：17205-17210，1996)；1997年，该实验室Zhou等人克隆了该蛋白的cDNA序列(Zhou Q.et al J.Biol.Chem.272(29)：18240-18244，1997)；1998年，Zhou等人又克隆了该蛋白在小鼠中的同源物的cDNA序列(Zhou Q.et al Biochemistry 37：2356-2360，1998)。

然而，在本申请之前没有公开过本发明所涉及的新的人磷脂翻转酶或其序列。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码一个新的磷脂翻转酶，本发明新的人磷脂翻转酶被命名为人PLS2。

本发明的另一个目的是提供一种新的人磷脂翻转酶蛋白，该酶被命名为人PLS2。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人磷脂翻转酶的方法。

本发明还涉及这种人磷脂翻转酶核酸序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人PLS2蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸118-849位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸118-849位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.3中从核苷酸118-849位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的人PLS2蛋白多肽，它包括：具有SEQID NO.4氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有人PLS2蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有人PLS2蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人PLS2蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸118-849位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人PLS2蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达人PLS2蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有人PLS2蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为892个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.3，其中开放读框位于118-849位核苷酸。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。