[发明专利]体内染色组合物,其制法及用于确认发育异常组织的方法

说明书

本申请以我在1997年11月13日申请的国际申请PCTUS/97/20981和我在1998年7月6日申请的美国专利申请09/110788号为基础要求多个公约优选权。

本发明涉及新的适于人体内局部使用的生物染色组合物。

具体地说，本发明涉及新的甲苯胺蓝O(“TBO”)染色产品，以一定比例含有TBO和特定TBO衍生物的产品。

另一方面，本发明涉及制备TBO组合物的新方法，所述组合物包括这些新的TBO产品，如我的在先国际申请所述。

此外，本发明涉及改进的制备方法，TBO的产量更高，制备起来更经济，生产设备的制造能力更高，如我的USA申请所公开的那样。

另一方面，本发明涉及这种新的TBO组合物在体内使用，来确定怀疑发育异常即不正常组织的方法。

另一个进一步的方面，本发明涉及组合物，用其在体内诊断的方法，和制备它的方法。该组合物特别适于确定怀疑为发育异常的口腔组织，特别是癌症及癌症前期的组织。

另一方面，本发明涉及新的经合成、分离鉴定和回收的TBO的N脱甲基产物。

另一方面，本发明涉及分析含有构象异构体和其他结构相关的化合物的TBO产物的HPLC方法。

从下面说明书连同权利要求和附图的详细说明中，本领域技术人员将明了本发明的多种实施方式以及实践意义。

图1是254nmHPLC曲线图，描绘已知的和可商购的TBO产物组合物的典型特征峰值。

图2是254nmHPLC曲线图，描绘本发明典型的TBO产物组合物的特征峰值。

图3是生产流程图，描绘我所发现的制备TBO产物包括本发明的新TBO产物组合物的方法。

多数口腔疾患是外伤导致的。但其他的口腔疾患则是发育异常的组织，其中一些可能是良性的，另一些则可能是癌症的或癌症前期的。此外，许多发育异常的组织非常小，容易在常规的外表检查中被牙科医生忽略。

体内诊断试验是已知的确认和描述怀疑为发育异常口腔组织的方法。在授予Mashbergd的美国专利4321251和授予Tucci等人的美国专利5372801中描述了这一筛选试验。近来，已经开发了试剂盒使诊断人能更快更容易地进行该试验，成为其他常规牙科检查过程的一部分，从而在患者并无症状或当发育异常疾患还非常小而通常的外部检查容易忽视其的情况下一次就确认和/或描述被怀疑的部位。一旦由Mashberg方法确认了被怀疑发育异常疾患，可提取活组织检查试样进行组织检查，从而确定该疾患是否是恶性的或癌症前期的。进行这一试验的试剂盒包括由Zila公司许可的、以适宜的量和浓度预混的染色和漂清溶液，可从加拿大由Germiphene公司以ORASCAN^TM商标购得，和从英国、澳大利亚由Stafford-Miller公司以“ORASCREEN^”商标购得。

已经发现可从卖主处商购的现有技术TBO产品中的有机染料含量相当低。典型地，代表这些现有技术产品中的TBO构象异构体的254nmHPLC峰的结合面积(参见实施例3,HPLC方法)只有代表全部TBO和TBO相关成分(即TBO的两个构象异构体加最多到六个TBO相关成分)的254nm HPLC峰的结合面积的约2％-75％。

参见图1,HPLC峰7和峰8代表TBO的两个构象异构体(此处为氯化物盐)：HPLC峰5和峰6被确认为TBO的两个构象异构体的N-脱甲基衍生物：HPLC峰2和峰3被确认为TBO的两个构象异构体的N,N-脱甲基衍生物：HPLC峰1和峰4代表的化合物的准确结构尚未确定。

在任何情形下，峰1-4代表的化合物在图1代表的典型现有技术TBO组合物中的存在量高于在本发明中的(见图2)，而峰5-8代表的化合物的存在量则低于在本发明TBO产品中的存在量。现有技术(图1)中，峰5和峰6代表的TBO构象异构体的两个N-脱甲基衍生物以较高的量存在，典型地为有机染料含量的20％以上，高于在本发明TBO产品中的存在量。