[发明专利]一种可用于人体补铁的铁蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可用于人体补铁的铁蛋白及其制备方法和应用。

人体容易缺铁，目前医药上用无机铁补充人体，以减少因缺铁而引起贫血症，但效果很差，因无机铁不易吸收，且口感不好，易引起恶心和降低食欲，国际上都正在以铁蛋白补铁为研究方向，铁蛋白是植物中广泛存在的一种蛋白质，在它的每个分子中含有4个铁原子，其分子量是12000，铁在这一蛋白中称非血晶质的铁。

本发明目的是提供一种可用于人体补铁的铁蛋白及其制备方法和应用，该方法获得的铁蛋白表达量高，含铁量多。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：这种可用于人体补铁的铁蛋白包括蛋白质和铁，其中含铁2-5％，其余为蛋白质。

一种可用于人体补铁的铁蛋白的制备方法，其特征包括以下几个步骤：

①工程菌高密度培养；

②铁蛋白的制备。

实施例1.

1.工程菌高密度培养

含铁蛋白基因的工程菌为大肠杆菌BL21(DE3)，载有铁蛋白基因的载体为pSE280。大肠杆菌工程菌通过三级培养，一级和二级在200转/分摇床上，在37℃下用三角形在LB培养基上培养，各培养6-8小时，依1％的接种量三级上罐培养，发酵罐为20升，罐培养时用高密度培养基，37℃培养，约培养5小时后OD600值为13-15时，用IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导，每升加入0.5mol/L IPTG溶液0.5毫升。诱导3-4小时后放罐。最终菌液OD600值约为18。柠檬酸铁铵开始加入0.1克/升，当用IPTG化学诱导表达后，依菌体重逐渐增加投入量至不影响菌体生长的最大量。最终加至每升菌液为0.35克。获得湿菌体量为60-70克/升。

所用的高密度培养基配方为：

硫酸铵5.0克/升，磷酸氢二钾6.0克/升，

磷酸二氢钾3.0克/升，硫酸镁1.5克/升，

胰蛋白胨10-20克/升，酵母提取物2-10克/升，

葡萄糖80-100克/升，

微量元素(铜、钴、钙、锌、钼、锰)各10^-5-10^-4克分子/升。

2.产品制备

罐中培养后用连续离心机12000转/分离心收集菌体，湿菌体如不马上处理可放在-20℃下保存。

湿菌体用5倍蒸馏水悬浮，在1000Psi压力下破碎细胞(或用超声波破碎仪破碎)，在10000转/分下离心15分钟，上清液用5倍体积的分析纯乙醇沉淀蛋白，测定物在40℃减压干燥，产品再研磨成粉，即得铁蛋白制品。此种铁蛋白制品的含铁量约为2-5％。

3.产品的急性毒性实验、药效实验和含铁量测定如下，并可详见附件1、2、3。

1、产品的急性毒性实验：使蛋白粉剂小鼠灌胃给药的最大耐受量为8000mg/kg，在连续7天观察中动物一般状况良好，行为等未见异常，无死亡动物，且体重增长。

2、药效实验：经口灌服160mg/kg和80mg/kg，铁蛋白对氛铁贫血大鼠具有明显抑制贫血形成的作用。

3、含铁量测定：Fe含量为5.23％。

本发明优点：

1.本方法获得的产品含铁量高，约2-5％，副件实验证明可用于人体补铁，用于治疗因缺铁引起的血色素缺乏症；

2.用高密度培养基可增加湿菌体生产量和产物生产量；

3.产品可用于正常人体的铁的补充，也可用于缺铁病人补铁。