[发明专利]RalGTP鸟嘌呤解离刺激因子

说明书

本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，以及利用所述多核苷酸生产所述多肽的方法。更具体地说，本发明的多肽是Ral GTP酶的鸟嘌呤解离刺激因子(RalGDS)家族的一个新成员。

Ras基因与细胞的生长、分化和转移性有密切关系，特别是该基因的突变往往与癌症的发生有关(Barbacid，M.(1987)Annu.rev.Biochem.56，.779-827)Ras通过与被称之为效应物的底物作用发挥其功能。目前已发现了多种Ras的效应物，包括Raf、PI(3)激酶的p110亚基、RalGDS家族、Byr2(S pombe)、Adenylyl cyclase(S.cerevisiae)Rin、AF6、canoe、PKC-ζ和MEKK-1等(McCormick，F.and Wittinghofer，A.(1996)Current Opinion in Biotechnology.7，449-456)。Ras可以通过几个不同的信号传递途径发挥功能，目前了解得最为清楚的是Raf/MAPK(mitogen-activated protein kinase)途径。

但是近几年越来越多的研究表明，存在着Ras-RalGDS-Ral这样一个不依赖于Raf的新的途径，从而RalGDS家族在Ras功能中起着重要作用。现已发现的RalGDS家族成员大多数都被证明具有催化结合于Ral蛋白上的GDP(非活化状态)解离的功能，从而促使Ral向其活化状态(与GTP结合)转化。实验表明，许多RalGDS家族成员都能与Raf协同作用，增强其在诱导癌变方面的作用，并且，这种协同作用不是通过增强Raf途径的作用而实现的。有的RalGDS家族成员还被发现能与TC21的活化状态结合，它们可能参与了TC21在诱导肿瘤方面的作用。除Ras(或TC21)外，许多RalGDS家族成员还能与Rap蛋白结合。Rap也是Ras家族的一个成员，但是，与众不同的是，它能够抑制Ras致癌作用，RalGDS在其中的作用值得研究。另外，在对鼠RalGDS的研究中，还发现RalGDS可能有除Ral以外的底物，这说明RalGDS家族还可能在其它的信号传递途径中发挥作用。

1993年，Albright，C.F.等首先在小鼠的3T3/ΔXB细胞系和大鼠的成纤维细胞系cDNA文库中，通过寻找编码与CDC25和ste6蛋白保守区同源的基因的办法发现了RalGDSa和RalGDSb基因的全长(Albright，C.F.et al.(1993)EMBO J.12(1)，339-347)。次年，Kikuchi，A.等在寻找Ras结合蛋白时，运用酵母双杂交系统发现了小鼠基因RGL(RalGDS-like)的Ras结合区域RID，以此为探针筛库而得到该基因全长。RGL与RalGDS具有70％氨基酸同源性，在CDC25同源区两者的同源性更高，故在而认为RGL和RalGDS构成一个家族(Kikuchi，A.et al.(1994)Mol.Cell.Biol.14，7483-7491.)。RLF(RalGDS-like factor)则是最初作为一个新的CDC25家族成员，在1996年由Wolthuis，R.M.等发现的小鼠基因，它是在寻找Rap 1A的结合蛋白时在酵母双杂交系统中得到的(Wolthuis，R.M.et al.(1996)Oncogene 13，353-362)。该基因编码了一个778个氨基酸的蛋白，这一蛋白与RalGDS和RGL都约有30％的氨基酸是相同的，尤其在RLF的羧基端保守性更强，也被认为是RalGDS家族的一个新的成员。Peterson，S.N.等于1996年用酵母双杂交系统寻找Rap1b的结合蛋白时，发现发现了一个人cDNA的部分克隆。通过同源比较发现，这一部分cDNA与RalGDS和RGL具有重要的同源性，它包括了完整的羧基端和部分的RBD，他们把它命名为RGL2(peterson，S.N.et al.(1996)J.Biol.Chem.271(47)，29903-29908)。