[发明专利]牛呼吸道冠状病毒作为疫苗

说明书

                       发明背景

发明领域：本发明涉及可以以改良活体型、灭活型、或亚单位形式应用的牛呼吸道冠状病毒，用于制备疫苗，预防牛呼吸道冠状病毒(BRCV)和牛肠道冠状病毒(BECV)产生的疾病。本发明还涉及可以以改良活体型、灭活型、或亚单位形式应用的牛肠道冠状病毒，用于制备疫苗，预防牛呼吸道冠状病毒或牛肠道冠状病毒产生的疾病以及所述疫苗的制备方法和应用。

现有技术的简单描述：在接种疫苗的畜群中爆发的呼吸道疾病出现这样的问题，即存在其它的病毒或细菌涉及引发牛呼吸道疾病综合症(运输发热)。经鉴定这种疾病综合症的主要原因为以下四种病毒：传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)，副流感病毒3型(PI₃)，牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)。为预防这些疾病综合症，现有技术使用接种疫苗的方法，包括所有这些病毒的单体型(单价)或者组合型(如果任何两种病毒存在于一种疫苗中则为二价或者如果两种以上病毒存在于一种疫苗中则为多价)作为疫苗的应用。过去，这些疫苗看来是有效的。然而，最近用这些疫苗控制牛呼吸道疾病综合症已经令人质疑，因为接种过疫苗的畜群仍然爆发呼吸道疾病，显示其它病毒或细菌涉入的可能性。

早在1984年，McNulty等从患有呼吸综合症的小牛呼吸道分离出牛冠状病毒(Vet.Micro.(兽医微生物学)1984，9：425-434)。从那以后，一直存在着意义重大的争论：是否牛呼吸道分离出的冠状病毒(BRCV)是用目前牛呼吸道疫苗接种的牛群中爆发的疾病的病因。如果是这样，还存在着这样的争论：BRCV与牛肠道分离出的冠状病毒(BECV)是否相同。

BECV，由Mebus等于本世纪70年代首次分离(Am J Vet Res.(美国兽医研究杂志)1973，34：145-150)，现在普遍认为它是初生小牛腹泻的重要病因。还发现它与成年牛冬季腹泻有关。在增殖BECV过程中，现有技术使用多种细胞类型，包括原代细胞(气管和消化道培养物)以及几种细胞系。细胞系的例子包括：人直肠瘤细胞(ATCC命名为HRT-18)，Vero细胞，Madin Darby牛肾脏(MDBK)细胞和Madin Darby犬类肾脏1(MDCK1)细胞。添加外源胰蛋白酶能够增强或者促进这些及其它一些细胞系中BECV的生长。在这些细胞的早期传代培养物中，BECV的增殖一般不产生的可识别的细胞病变作用(CPE)。后期传代细胞产生显著的CPE，特征在于合胞体的形成和细胞分离。

一种疫苗已经制备出来并可经正常渠道获得，其用于预防BECV引起的小牛肠道疾病。在产犊之前对牛使用以便预防。该疫苗的保护能力已经引起质疑，因为它依赖于被动免疫(Myers和Snodgrras，1982，J AmVet Med Assoc(美国兽医学会杂志)181：486-488和Mostl和Burki。1988，J Vet Med(兽医杂志)：35，186-196)。给牛口服改良的活BECV进行的免疫证明在实验室实验中能够保护初乳缺乏牛，但在野外实验中无效(Thurber等，1977，Can.J.Comp.Med.，41：131-136)。