[发明专利]组织特异性启动子

说明书

发明领域

本发明涉及前列腺基因启动子与通用的增强子SV40增强子的联合，从而产生在前列腺细胞中有活性的基本不依赖于雄激素的启动子，这些前列腺细胞在它们的生长和生存中是不依赖于雄激素的。

发明背景

已经鉴定了在雄性的前列腺中领先表达的许多基因。利用转染技术或在转基因小鼠中表达基因之后已经研究了许多这样的基因的启动子和调节区。大多数鉴定为前列腺特异性的基因是雄激素可诱导的，他们的功能的方面已经详细地研究了。所以，在前列腺特异的抗原(PSA)(Cleutjens，Vaneekelen等人，1996，Riegman，Vliestra等人，1991)，人腺激肽释放酶(KLK2)(Murtha，Tindall等人，1993)，大鼠前列腺类固醇结合蛋白质(PSBP)(Claessens，Rushmere等人，1990；Rushmere，Parker等人，1987)，Probasin(Pb)(Kasper，Rennie等人，1990；Rennie，Bruchovsky等人，1993)，和前列腺酸性磷酸酶基因(Virkkunen，Hedberg等人，1994)，和在大鼠PSBPC3(1)基因的内含子中的调节元件中，和大鼠20千道尔顿雄激素调节蛋白(Ho，Marschke等人，1993)中已经鉴定了雄激素效应元件的诱导表达和/或结合雄激素受体的重要性。

虽然结合PSBP C3基因启动子和第一内含子的区域的组织特异因子已经得到鉴定，但参与赋予表达的区别于雄激素效应性的前列腺特异性的元件还没有很好鉴定(Celis，Claessens等人，1993；Zhang，Parker等人，1990)。具有4kb上游和2kb下游侧接序列的大鼠PSBP C(3)基因在转基因小鼠中组织特异性地并在适当的激素控制下得到表达(Allison，Zhang等人，1989)。利用来自大鼠PSBP C3(1)基因的5kb上游区表达SV40T-抗原可以引发前列腺肿瘤，但表达不是高度受限制的，其它异常状态是常见的(Maroulakou，Anver等人，1994)。利用转基因小鼠的研究已经确定probasin和PSBP C(3)基因的区域可以赋予前列腺特异性。

PSA和probasin调节区在前列腺表达基因中是两个研究最多的。已经确定大鼠probasin基因的上游的430bp区能够赋予报道基因表达的前列腺特异性(Greenberg，Demayo等人，1994；Matusik；WO9403594)；当用于SV40T抗原的靶表达时，前列腺肿瘤特异地发生(Greenberg，Demayo等人，1995)。这一表达不是总是特异的，但特异性明显由包含来自小鸡溶菌酶基因的MAR(基质附着区)而提高(Greenberg，Demayo等人，1994)。430bp启动子区强烈地应答雄激素诱导，并且结合雄激素受体(AR)的雄激素效应元件已经得到鉴定(Claessens，Rushmere等人，1990；Kasper，Rennie等人，1994；Matusik，WO9403594；Rennie，Bruchovsky等人，1993)。在碱基-426和-286之间的负调节区也已经得到鉴定(Rennie，Bruchovsky等人，1993)。

PSA上游区(到-630bp)也作为强雄激素效应性启动子起作用并且也已经鉴定了雄激素效应元件。但是，这一区不足于在转基因小鼠中指导组织特异表达。利用该630bp人PSA启动子区在转基因小鼠中表达和活化的Ha-ras致癌基因导致唾液腺而不是前列腺肿瘤的发育(Schaffner，Barrios等人，1995)。在转录起始位点上游的4到5kb区中最近已经鉴定了增强子区。已经证明PSA增强子可作为雄激素可诱导增强子并且结合PSA启动子展示了明显的细胞类型特异性(Henderson，WO9519434；Schuur，Henderson等人，1996)。同样Pang等人已经报道了从前列腺癌病人分离的等当启动子区与公开序列相比含有7个突变，并且在前列腺癌细胞系LNCaP中是高度活化的(Belldegrun和Pang，WO9614875；Pang，Taneja等人，1995)。