[发明专利]可从动物器官中提取的蛋白质在制备可用于治疗疾病的药物中的用途

说明书

本发明涉及可从动物器官中提取的蛋白质在制备可用于治疗以肿瘤坏死因子(TNF)过量产生为特征之病理状态的药物中的用途。

肿瘤坏死因子，又名恶液质，是一种促炎症反应细胞因子，它与IL-1一起，在启动可引起感染和癌症情况下的免疫反应的其它细胞因子和因子的级联反应中起着重要作用。这一反应对于使感染和肿瘤转移过程完全消退是非常重要的，但它可能以不受控制的方式发生，从而导致对宿主的损害。一般认为肿瘤坏死因子过量产生与一些病理状态相关，如败血症性休克、肿瘤恶病质、自身免疫疾病(类风湿性关节炎、多发性硬化症)、脑膜炎球菌性败血症和Chron’s disease等。

WO 92/10197公开了可利用高氯酸从哺乳动物器官中提取的蛋白质成分，以及它们作为抗肿瘤制剂的用途。在这些成分中，可鉴定出三种主要成分，它们在凝胶电泳中的分子量分别为50、14和10Kda。今后，包含这三种主要成分的纯化提取物称为UK 101。上述活性即使不是全部也主要是由14Kda蛋白质成分决定的，它的序列在WO 96/02567中得到报道，并且被证明与其他作者的发现相关(Levy-Favatirer，Eur.Biochem.1903，212(3)665-73)，该作者推断此种新鉴定的蛋白质属于一个称为伴侣蛋白的蛋白质家族，这个家族也包含热休克蛋白(HSP)。

在WO 92/10197和WO 96/02567中所描述的蛋白质(今后称为UK 114)具有以往在伴侣蛋白及其类似蛋白质中从未观察到的特性。尤其是目前发现这些蛋白质能够显著降低血液中肿瘤坏死因子的水平，因而可用于治疗以肿瘤坏死因子过量产生为特征的疾病。

本发明特别涉及纯化过的蛋白质UK 114的用途。

另外本发明包含与UK 114具有80％以上、尤其是90％或以上高同源性的蛋白质的用途。

蛋白质UK 101和UK 114的活性已在体外在外周血单核白细胞上得到了证实，在体内通过评价UK 101给药后对小鼠脾细胞产生肿瘤坏死因子的影响得到了证实，报告如下：体外实验

在UK 114(1μg/ml和10μg/ml)存在或不存在的条件下，用脂多糖(100ng/ml)体外刺激密度为10⁶/ml的外周血单核白细胞4小时。

由ELISA方法测定肿瘤坏死因子的浓度。结果

体外加入UK 114抑制了外周血单核白细胞产生肿瘤坏死因子。

UK 114浓度为1μg/ml时，抑制效果达90％，浓度为10μg/ml时，抑制效果达70％。体内实验处理：

15天中隔天以100μg/只的剂量用UK 101处理小鼠(7次注射)

分别在第一次注射48小时后和最后一次注射后48小时测定肿瘤坏死因子的浓度。

细胞的制备和肿瘤坏死因子的测定

在有10μg/ml多克隆有丝分裂原伴刀豆球蛋白A(With-A)的存在下，将脾细胞(4×10⁶/ml)于37℃，5％CO₂培养48小时。

用免疫酶联方法(ELISA)测定产生并释放到上清中的肿瘤坏死因子的量。结果

小鼠脾细胞产生肿瘤坏死因子的量在经UK 101处理后显著下降。此效果在第一次后注射48小时已经比较显著，在第七次注射后48小时效果依然存在。TNF，pg/ml            生理盐水   UK 101第一次注射后48小时    387±72    247±30^□第七次注射后48小时    366±46    264±76.1^□□＝p值

因此，UK 101和UK 114能够调整以肿瘤坏死因子过量产生为特征的病理状态(如多发性硬化症、类风湿性关节炎、肿瘤形式、败血症性休克和Chron’s disease等)的进程，或对其进行抑制。

本发明的蛋白质可以以合适的形式给药，优选可注射形式。

给药方法(剂量、给药频率等)可以依据环境决定，取决于一些因素，如患者状况、疾病阶段。然而，1-100mg的日剂量将是合适的。

                        表

Met Ser Glu Asn Ser Glu Glu Pro Val Gly Glu Ala Lys Ala

1               5                   10

Pro Ala Ala Ile Gly Pro Tyr Ser Gln Ala Val Leu Val Asp