[发明专利]选择性连接及扩增方法

权利要求书

1.一种扩增特异靶核酸序列的方法，该方法包括：

 (1)形成一反应混合物，包括：

   (i)靶序列；

   (ii)引物，包括第一个引物，其3’末端至少有一部分与靶序列第一个末端的第一个区段基本上互补，第二个引物，其5’末端至少有一部分与靶序列第二个末端的第二个区段基本上互补，第二个引物的5’末端与第一个引物的3’末端相邻，以及第三个引物，其与第二个引物3’末端的的一个区段基本上互补；

   (iii)至少四种不同的核苷酸碱基；

   (iv)热稳定聚合酶及热稳定连接酶；以及

 (2)循环加热该反应混合物。

2.一种在含有核酸的样本中检测特异靶核酸序列的方法，包括：

 (1)形成反应混合物，包括：

   (i)怀疑包括靶序列的核酸样本；

   (ii)引物，包括第一个引物，其3’末端至少有一部分与靶序列第一个末端的第一个区段基本上互补，第二个引物，其5’末端至少有一部分与靶序列第二个末端的第二个区段基本上互补，第二个引物的5’末端与第一个引物的3’末端相邻，以及第三个引物，其与第二个引物3’末端的的一个区段基本上互补；

   (iii)至少四种不同的核苷酸碱基；

   (iv)热稳定聚合酶及热稳定连接酶；以及

 (2)循环加热该反应混合物；以及

 (3)检测代表特异靶核酸序列存在的扩增产物的存在与否。

3.如权利要求1或2的方法，其中该方法还包括在循环加热反应混合物之后，进行基本上灭活热稳定聚合酶，接着进行第二轮热循环反应混合物的步骤。

4.如权利要求1-3任一方法，其中与第三个引物与之基本上互补的第二个引物的区段是随机序列。

5.如权利要求1-4任一方法，其中反应混合物包括第四个引物，其具有与第一个引物5’末端的区段相同的序列。