[发明专利]癌症的快速诊断方法

权利要求书

1.癌症诊断的方法，该方法包括：

(a)将待测个体的稀释的血清样品与纯化的碳酸酐酶II溶液混合，制备第一反应混合物；

(b)确定所述第一反应混合物中碳酸酐酶II的活性；

(c)确定第二反应混合物中碳酸酐酶II的活性，所述第二反应混合物含有除血清以外的所有第一反应混合物；和

(d)评估相对于步骤(c)，步骤(b)中碳酸酐酶II的激活程度。

2.权利要求1的方法，其中所述稀释的血清样品含有0.1体积％至50体积％，优选1至10体积％的血清。

3.权利要求1或2的方法，其中所述稀释的血清样品稀释剂选自水和含水有机溶剂，所述稀释剂可任意地含有缓冲液。

4.权利要求1的方法，其中纯化的碳酸酐酶II溶液中的碳酸酐酶II的浓度为0.01 nM至1.0mM，优选1.0nM至1.0μM，其中所述溶液的溶剂选自水和含水有机溶剂，所述溶剂还可含有缓冲液和/或指示剂。

5.权利要求1的方法，其中稀释血清样品与纯化碳酸酐酶溶液以100∶1至1∶100，优选10∶1至1∶10，最佳以1∶1的比例混合。

6.权利要求1的方法，其中所述第一反应混合物含有0.05至25体积％，优选0.1至10体积％，最佳0.5至5体积％的血清。

7.权利要求6的方法，其中含25体积％或更少，优选5体积％或更少血清的第一反应混合物相对于第二反应混合物中的碳酸酐酶II活性有100％或更高的激活作用，表明在个体中存在致癌过程。

8.权利要求1的方法，其中稀释的血清样品是含10体积％血清的含水溶液，纯化的碳酸酐酶II溶液是含1.0至10nM碳酸酐酶II的含水缓冲液，所述第一反应混合物通过将所述稀释的血清样品与所述纯化的碳酸酐酶溶液以1∶1的比例混合来制备。

9.权利要求1或8的方法，其中通过截流动力测量法测量碳酸酐酶II的二氧化碳水合作用来测定所述酶。

10.权利要求9的方法，其中第一和第二反应混合物的开始pH为7.5，其中所述酶活性的确定包括将第一或第二反应混合物与底物溶液混合，所述底物溶液是含5至50mM二氧化碳，优选10至25mM二氧化碳，最佳15mM二氧化碳的含水溶液，然后测量达到最终pH6.5所需的时间。

11.权利要求1的方法适用于检测与癌症阶段无关的，特别是无症状阶段或早期个体中的癌症过程。

12.权利要求1的方法适用于不同阶段不同部位的癌症诊断筛选试验，所述癌症包括咽癌、胃癌、食管癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、膀胱尿道癌、甲状腺癌、唇癌、白血病、恶性黑素瘤、Hodgkin淋巴瘤和任何其它形式的癌症。

13.在癌症患者血清中存在的肿瘤标记，所述肿瘤标记在1μM或更低的浓度可激活碳酸酐酶II。

14.权利要求13的肿瘤标记，选自肿瘤坏死因子α和β、癌胚抗原、唾液酸、α₁抗胰凝乳蛋白酶和sp 185^Her2癌蛋白。

15.治疗癌症的方法，该方法包括通过癌症诊断方法，检测无症状期或早期患者体内的癌症过程，所述癌症诊断方法包括：

(a)将待测个体的稀释的血清样品与纯化的碳酸酐酶II溶液混合，制备第一反应混合物；

(b)确定所述第一反应混合物中碳酸酐酶II的活性；

(c)确定第二反应混合物中碳酸酐酶II的活性，所述第二反应混合物含有除血清以外的所有第一反应混合物；和

(d)评估相对于步骤(c)，步骤(b)中碳酸酐酶II的激活程度。

16.用于完成权利要求1或15的癌症诊断方法的试剂盒，该试剂盒含有含碳酸酐酶II的组合物。