[发明专利]酶促DNA分子

权利要求书

1.一种具有位点特异性内切核酸酶活性的催化活性DNA分子，这种活性针对预先选定的底物核酸序列中被定义为切割位点的核苷酸序列具有特异性，

所述分子具有位于核心区域旁侧的第一和第二两个底物结合区域，

其中所述的第一底物结合区域有一段序列与所述预先选定的底物核酸序列中的第一部分互补，

所述的第二底物结合区域有一段序列与所述预先选定的底物核酸序列中的第二部分互补，

所述核心区域有一段根据下列通式的序列：

(I.)T(茎)’AGC(茎)”Z，

其中(茎)’和(茎)”都是具有以下特征的一种三联核苷酸：即当(茎)’：(茎)”杂交配对时形成的3个碱基对中至少包括2个G：C对，其中所述的Z＝WCGR或WCGAA，W＝A或T且R＝A或G；或

(II)RGGCTAGCXACAACGA(SEQ ID NO 122)，

其中所述的X＝T、C或A，R＝A或G。

2.权利要求1中的分子，其中所述的通式I为SEQ ID NO 120(8-17)。

3.权利要求1中的分子，其中所述的通式II为SEQ ID NO 121(10-23)。

4.权利要求1中的分子，其中所述的第一或第二底物结合区域的长度为5～13个核苷酸。

5.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的催化活性DNA分子包括脱氧核糖核苷酸(DNA)、修饰后的DNA、核苷酸类似物或其组合。

6.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的底物核酸包括RNA、DNA、修饰后的RNA、修饰后的DNA、核苷酸类似物或其组合。

7.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的催化活性DNA分子包括一段具有5’和3’末端的单链脱氧核糖核酸，其中所述的末端经过具有外切核酸酶抗性的核苷酸的修饰。

8.权利要求7中的催化活性DNA分子，其中所述的具有外切核酸酶抗性的核苷酸包括核苷硫代磷酸酯。

9.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的第一或第二底物结合区域包括至少2个硫代磷酸酯核苷。

10.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的核心区域包括在所述核心中的二联嘧啶上有1个硫代磷酸酯核苷。

11.权利要求7中的催化活性DNA分子，其中所述的3’末端包括1个倒转的(3’，3’-连接)核苷酸。

12.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的催化活性DNA分子包括1个2’O-甲基核糖核苷酸。

13.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的第一和第二底物结合区域包括一段与选自SEQ ID NOs 102～119的序列互补的核苷酸序列。

14.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的分子能够催化K_m值约0.05～1000nM的反应。

15.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的催化活性DNA分子以低于约1.0微摩尔的K_m与所述底物结合。

16.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的催化活性DNA分子以低于约0.1纳摩尔的K_m与所述底物结合。

17.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的分子具有的催化反应转换速度(k_cat)为约0.005～0.1min^-1。

18.权利要求1中的催化活性DNA分子，其中所述的内切核酸酶活性因二价阳离子的存在而增强。

19.权利要求18中的催化活性DNA分子，其中所述的二价阳离子选自Pb²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺、和Ca²⁺。

20.权利要求18中的催化活性DNA分子，其中所述的内切核酸酶活性因Mg²⁺存在而增强。