[发明专利]包含作为佐剂的甘油单酯或甘油二酯衍生物的抗原释放系统

说明书

相关申请

本申请是冰岛专利申请4518(1997年7月9日递交)的部分延续，这里引用了其所有涉及内容并包含于本文中。

发明背景

通常认为，肠胃外给药(肌内和皮下)抗原或疫苗是最为有效的给药途径。然而，通过注射给药有许多缺点。注射抗原或疫苗需要无菌注射器和经过培训的人员来完成，并且有可能引起疼痛和刺激，尤其是在重复注射情况下。这种给药途径也具有感染的危险。最为重要的是，很少有人能够忍受肌内注射，在注射部位可能引起硬结(组织硬化)，出血(流血)和/或坏死(组织局部坏死)。

粘膜包含大量的树枝状细胞，其是极好的抗原显露细胞。粘膜也与淋巴器官(叫作粘膜相关淋巴组织)相连，相连的淋巴器官能够加强对粘膜其它区域的免疫反应。这种粘膜的例子如鼻上皮膜，其本质上由一单层上皮细胞(假复层上皮)组成，该粘膜与两淋巴组织，增殖腺(腺样体)和扁桃体相连。鼻粘膜下扩张的毛细血管网及高密度的T和B细胞，特别适合于快速识别抗原并快速作出免疫反应。

曾经尝试鼻内施用相对特定病原体的减毒病毒、细菌和寄生虫(连同通过其它的粘膜表面给药一起)，因抗原体通常通过这一途径感染寄主。我们希望这些病原体能够通过粘膜表面引起免疫反应，因为疫苗中经修饰的活病原体遵循野生型病原体的自然感染途径，即通过亚临床感染产生免疫反应。由于粘膜给以免疫原组合物能够刺激局部产生抗体(分泌IgA抗体)，并避免了通过肠道外给药引起的问题，因此人们对此特别感兴趣。而且，粘膜给药甚至可由未经培训的人来完成，包括接受治疗的本人，以及典型的反对肠道外给药甚于粘膜给药的儿童。由于施用活的、减毒的、修饰病原体具有危险性，因此通常可取的方法是施用亚单位疫苗。然而，通过粘膜施用亚单位疫苗中纯化抗体通常只引起微弱的免疫反应。

已开发了多种释放抗原载体系统，利用这种载体系统存在的问题之一是，例如对于肌内和粘膜给药来说，抗原和/或疫苗在未经识别情况下便被吸收或降解，因此也就未引起免疫反应，特别是在鼻腔内只有短时间接触时这种情况容易发生。曾有报道一种聚乙二醇取代的辛酸/癸酸甘油酯和吐温20的混合物，将用作为粘膜佐剂(Gizurarson等，毒理学Toxicology 107：61-68(1996)；Gizurarson等，疫苗研究VaccineResearch 5：69-75(1996)；Gizurarson等，疫苗研究Vaccine Research6：41-47(1997))。然而，这种配方会在受者的给药部位引起不舒服的刺痛感。这样，就需求一种用于粘膜给以抗原的有效配方，以产生可接受的免疫反应。

EP专利0544612A2公开了一种组合物，其含有能够通过口腔或鼻腔给药的免疫原和甘油三酯。该组合物能够增强免疫原的效果。

在一篇参考文献中(美国专利4,610,868，1986年9月9日授权)，描述了一种脂质基质载体，将其用于药物的粘膜给药。这个系统要求脂质基质载体含有一种疏水化合物，一种具有球状结构(直径为500-100000nm)的两亲性化合物生物活性剂。这里疏水化合物可能包含一种甘油酯混合物，两亲性化合物可能包含一种鞘脂。而且，这种配制物可能经过鼻区施用。由于鼻腔内会被快速清除掉及其较大的球状结构，这个系统作为鼻部配制药，可能不会被接受。因此，该系统在释放生物活性剂之前就会由纤毛将其转移至胃部。该专利没有描述使用根据本发明的佐剂物质。

日本专利309347/91(优先权日1991年11月25日)描述了一种口腔或鼻腔用免疫原组合物，其包含一种能够免疫哺乳动物的免疫原，使用了一种含有具有饱和或不饱和C_6-26脂肪酸残基的甘油三酯佐剂。根据本发明，使用饱和脂肪酸不能引起免疫反应，使用甘油三酯不可能具有能够溶于佐剂的亲水集团或者使抗原与佐剂接触。

WO94/17827(优先权日1993年2月15日)描述了一种药物制剂，用于哺乳动物的抗原局部施用(通过粘膜施用)。佐剂/载体制剂选自以下物组：(a)聚氧乙烯脱水山梨糖醇单酯(b)聚氧乙烯蓖麻油(c)辛酸/癸酸甘油酯(d)神经节苷脂。

发明概要

本发明提供了一种组合物，其能够用作为抗原和疫苗施用时的佐剂，尤其是用作为粘膜施用的佐剂。本发明组合物加强了抗原与粘膜的粘连，也加强了通过粘膜对抗原的吸收。利用本发明的组合物，能够引起受体全身(例如IgG同型抗体)和局部(例如IgG同型分泌抗体)的免疫反应，并且不在上皮膜引起不能被接受的刺激。