[发明专利]来自EBV的CTL表位

说明书

发明领域

本发明涉及治疗或防止EBV感染的方法。本发明还涉及Epstein-Barr病毒(EBV)结构抗原及潜在(latent)抗原内的细胞毒性T细胞(CTL)表位，以及包含这些表位的亚单位疫苗和核酸疫苗。

发明背景

现在非常确定的是：由持续的病毒感染产生的长期保护需要病毒特异性的记忆T细胞的发生，它们识别与I型或II型MHC分子有关的病毒抗原。由于用病毒全蛋白免疫不能激发有效的CTL应答，人们对基于特定的表位序列设计疫苗产生了兴趣，对于致瘤病毒尤其是这样，因为在重组载体中导入单个病毒的基因具有起始致瘤过程的潜能。目前考虑两种主要的方法来设计有效疫苗以控制与Epstein-Barr病毒(EBV)有关的疾病(详见参考文献(7))，包括引发对EBV结构抗原或潜在抗原的免疫反应。

近几年，疫苗发展的大部分努力集中在gp350亚基制备物的应用上(重组并亲和纯化)，而且已经能阻止病毒对口咽部靶细胞的粘附(31)。一般方法是用gp350免疫白顶狨，测定动物体内它们限制EBV-阳性的淋巴瘤过量生长的能力。事实上，高纯度的gp350，当和佐剂(胞壁酰二肽或ISCOMS)一起皮下施用时，诱导了高水平的血清中和抗体并阻止了白顶狨体内肿瘤形成(32)。许多重组载体包括痘苗-gp350和腺病毒5-gp350，也成功地用于这些动物以阻止肿瘤过量生长(33)。gp350在白顶狨体内提供抗淋巴瘤的保护的精细机制尚不明了，接种动物体内中和抗体效价的发展并不总与保护水平相关，表明gp350特异性的T细胞介导的免疫应答可能也具有效应物的作用(34)。此外，Yao及其同事(35)指出很低水平的中和抗-gp350的抗体在健康的EBV免疫供体的唾液中出现，提示这类抗体不可能是健康的血清阳性个体内长期免疫的基础。推测gp350特异性的、T细胞介导的免疫应答在保护中具有效应物的作用，然而，迄今为止没有鉴别在EBV结构抗原内的CTL表位。

发生在器官移植病人中的移植后淋巴组织增生症(PTLD)是一个愈来愈重要的临床问题。PTLD的组织学分析显示出十分复杂的克隆多样性，从多形B淋巴细胞增生至恶性单克隆淋巴瘤。病理学上这个范围包含了共同的术语PTLD，而淋巴瘤通常是指淋巴母细胞淋巴瘤(IL)。这种情况显然与所有以前感染过的个体(约80％的成人和20％的7岁儿童)(45，46，47，48)终身携带的、Epstein-Barr病毒(EBV)感染的B细胞的增殖有关。EBV感染的B细胞通常在体内和体外被病毒特异的、细胞毒性T细胞(CTLs)限制生长(见下文)，这些CTL识别EBV潜在蛋白内的表位(48)。免疫抑制阻碍了这些特异性的CTL，导致了EBV感染的B细胞的扩增以及与PTLD有关的临床问题的出现。已经知道，PTLD风险最大的个体是从血清阳性的供体接受移植的EBV血清阴性的受体(Crawford和Thomas，1993)，对EBV血清阴性的受体在移植前进行免疫将大大降低PTLD的风险。

免疫系统在抵抗病毒相关的癌症中的作用也是最近深入研究的主题。根据研究提出的假说是：许多瘤表达可能使它们被免疫系统，包括T辅助细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，识别并破坏的病毒抗原。现在有大量证据表明大多数Epstein-Barr病毒(EBV)相关的恶性肿瘤通过限制病毒基因的表达逃避这种潜在的、病毒特异性的CTL应答(7，20，21)。就恶性肿瘤如鼻咽癌(NPC)和霍奇森病(HD)而言，EBV核抗原1(EBNA1)和潜在的膜蛋白1(LMP1)是唯一持续表达的抗原，因而是任何将来为控制这些肿瘤而设计的疫苗的潜在靶抗原(3，28)。由于非常明确了用病毒全蛋白免疫不能激发有效的CTL应答，人们将兴趣集中到基于特定的表位序列发展肽疫苗上。

发明概述

本发明人得到的结果表明EBV结构及潜在蛋白内的CTL表位在提供抗病毒免疫抵抗EBV感染方面可能有效。特别是，本发明人用肽稳定测定法分析了潜在抗原LMP1的序列，发现该抗原包含潜在的CTL表位。根据这些肽的体外活化作用，HLA A2阳性供体的CTL多克隆和克隆都对表达LMP1抗原的靶细胞表现出很强的反应，而且，表达不同HLA A2超型的淋巴母细胞系(LCL)均被这些CTLs有效识别，这是一个对旨在保护不同种族人群的抗病毒疫苗的设计有重要意义的结果。