[发明专利]突变酵母的乙醇产生

权利要求书

1.一种生产乙醇的方法，包括培养呼吸缺陷型酵母细胞及从该酵母细胞中分离乙醇，该细胞具有至少一种呼吸所需的在生长培养基中是无功能的和/或被抑制的核基因，或其产物。

2.根据权利要求1的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞由一种呼吸充分型酵母株衍生而来。

3.根据权利要求2的方法，其中相对于呼吸充分型酵母株，呼吸缺陷型酵母细胞的呼吸至少降低了60％。

4.根据权利要求2的方法，其中相对于呼吸充分型酵母株，呼吸缺陷型酵母细胞的呼吸至少降低了75％。

5.根据权利要求2的方法，其中相对于呼吸充分型酵母株，呼吸缺陷型酵母细胞的呼吸至少降低了85％。

6.根据权利要求2的方法，其中相对于呼吸充分型酵母株，呼吸缺陷型酵母细胞的呼吸至少降低了95％。

7.根据权利要求2-6中任一个的方法，其中通过对呼吸充分型酵母株的遗传修饰使得至少一种呼吸所需的核基因或其产物是无功能的，从而产生呼吸缺陷型酵母细胞。

8.根据权利要求7的方法，其中修饰是一种破坏基因产物的表达或功能的突变。

9.根据权利要求8的方法，其中通过核基因与DNA分子之间的同源重组引入突变。

10.根据权利要求9的方法，其中使用PCR-介导的基因破坏技术产生呼吸缺陷型酵母细胞。

11.根据前述任一权利要求的方法，其中核基因是PET基因。

12.根据权利要求11的方法，其中该基因为PET191。

13.根据权利要求12的方法，其中修饰PET191基因，使得从酵母细胞基因组中切除鉴定为SEQ ID NO.1的DNA序列，并用鉴定为SEQID NO.2的DNA序列替换。

14.根据权利要求12的方法，其中修饰PET191基因，使得从酵母细胞基因组中切除鉴定为SEQ ID NO.1的DNA序列，并用鉴定为SEQID NO.17的DNA序列替换。

15.根据权利要求12的方法，其中修饰PET191基因，使得从酵母细胞基因组中切除鉴定为SEQ ID NO.4的DNA序列，并用鉴定为SEQID NO.17的DNA序列替换。

16.根据权利要求1-10中任一个的方法，其中修饰的核基因与细胞色素c氧化酶的功能或表达有关。

17.根据权利要求14的方法，其中修饰的核基因是COX5a。

18.根据权利要求17的方法，其中修饰COX5a基因，使得从酵母细胞基因组中切除鉴定为SEQ ID NO.5的DNA序列，并用鉴定为SEQID NO.2的DNA序列替换。

19.根据权利要求1-6中任一个的方法，其中至少一种呼吸所需的核基因产物是无功能的和/或被抑制的。

20.根据前述任一权利要求的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞是酿酒酵母或其衍生物。

21.根据权利要求1-19中任一个的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞是葡萄汁酵母(卡尔酵母)或其衍生物。

22.根据权利要求1-19中任一个的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞是Saccharomyces sensu stricto组的成员或其衍生物。

23.根据权利要求1-19中任一个的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞是FY23或其衍生物。

24.根据权利要求1-19中任一个的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞是K1或其衍生物。

25.根据权利要求1-19中任一个的方法，其中呼吸缺陷型酵母细胞选自：M-株或其衍生物、红星或其衍生物、酒类酵母U.C.L.M.S325或其衍生物或酒类酵母U.C.L.M.S377或其衍生物。

26.根据前述任一权利要求的方法，其中生长培养基含有一种可发酵的糖作为碳水化合物来源。

27.根据前述任一权利要求的方法，其中生长培养基是YPD。