[发明专利]脂肪细胞特异性蛋白质同系物

说明书

发明背景

能量平衡(包括能量代谢、营养状态、脂类贮藏等等)是健康的一个重要准则。此能量的稳态包括食物吸收及碳水化合物和脂类的代谢以产生自觉和不自觉活动所必需的能量。蛋白质的代谢会导致能量产生，但优选导致肌肉形成或恢复。除了其它后果之外，缺乏能量稳态还会导致脂肪组织过多或过少的形成。

脂肪的形成和贮藏是胰岛素调节的。例如，胰岛素刺激葡萄糖转运进入细胞，在其中它将被代谢为可用于脂肪酸酯化以允许其作为甘油三酯贮存的α-磷酸甘油。此外，脂肪细胞表达一种特异的转运蛋白质，可增强自由脂肪酸进入脂肪细胞的转移作用。

脂肪细胞还分泌几种被认为可调节葡萄糖和脂类代谢之稳态控制的蛋白质。这些附加脂肪细胞分泌蛋白质包括adipsin、补体因子C3和B、肿瘤坏死因子α、ob基因产物和Acrp30。还有证据显示脂肪细胞中存在胰岛素调节的分泌途径。Scherer等人，生物化学杂志，270(45)：26746-9，1995。在某种程度上受脂肪组织过多或过少形成所影响的这些部分过高或过低的分泌会导致与肥胖症或厌食直接或间接相关的病理状态。

Acrp30是仅由脂肪细胞表达的247个氨基酸长的多肽。Acrp30多肽由氨基末端信号序列、未知同源性之27个氨基酸长的一段序列、22个完全Gly-Xaa-Pro或不完全Gly-Xaa-Xaa胶原蛋白重复序列及羧基末端球形结构域组成。参阅Scherer等人如上所述的文献及国际专利申请WO96/39429。Acrp30是由胰岛素调节、含量丰富的一种人血清蛋白质，它与补体因子Clq和冬眠性的西伯利亚花栗鼠的夏季血清蛋白质(Hib27)具结构相似性，尤其是在羧基末端球形结构域处。在脂肪细胞分化期间，Acrp30的表达被诱导超过100倍。Acrp30被建议用于调节能量平衡及鉴别试验样品中的脂肪细胞。

显示完全产生于脂肪细胞中的另一种分泌蛋白质是apM1，其在例如Maeda等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.221：286-9，1996中有述。其一个4517bp长的克隆具有244个氨基酸的开放阅读框架和长的3′非翻译区。该蛋白质包括信号序列、氨基末端非胶原蛋白序列、22个胶原蛋白重复序列(Gly-XAA-Pro或Gly-Xaa-Xaa)、及与胶原蛋白X、胶原蛋白VIII和补体蛋白质Clq同源的羧基末端区域。

补体因子Clq由6拷贝的三个相关多肽(A、B和C链)组成，每个多肽约225个氨基酸长并有一近氨基末端的胶原蛋白结构域和一羧基末端球形结构域。由6个A、6个B、6个C链的胶原蛋白结构域形成6个三重螺旋区，从而形成一中心区及6个柄。由1个A、1个B和1个C链的球形羧基末端结构域联合形成球状头部。因此Clq由通过6个类胶原蛋白柄与中心轴丝区域连接的6个球形头组成。Sellar等人，生化杂志，274：481-90，1991。这个结构通常被称为花束。Acrp30具有由单一类型多肽链形成的类似花束结构。

人们一直寻找能调节能量稳态的分子，以研究此现象并预防或治疗不平衡病症。此外，还寻找能调节脂肪细胞分泌途径的分子作为间接能量稳态调节子和研究试剂。

本发明为本文所述用途及其它用途提供了这样的多肽，所说的其它用途对本领域技术熟练人员是显而易见的。

发明概述

本发明一方面提供了所含一段氨基酸残基序列与SEQ ID NO：2第26-281位氨基酸序列至少具75％同一性的分离多肽，其中所说的序列包含：形成胶原蛋白结构域的Gly-Xaa-Xaa或Gly-Xaa-Pro重复，其中Xaa可为任何氨基酸；以及一羧基末端球形部分。在一实施方案中，该多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：2之第26-281位残基至少有90％的同一性。在相关方面，该多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：2之第22-281位残基至少有90％的同一性。在另一实施方案中，该多肽含SEQID NO：2或SEQ ID NO：44的第1-281位残基。在又一实施方案中，多肽在氨基末端或羧基末端共价连接了亲和标记、毒素、放射性核苷酸、酶或荧光团类的一部分。在一相关实施方案中，还在所说氨基酸残基序列和所说亲和标记之间进一步提供了蛋白水解断裂位点。