[发明专利]用混合双链寡核苷酸在植物中实现定点遗传改变的用途有效
申请号: | 98809867.9 | 申请日: | 1998-08-05 |
公开(公告)号: | CN1273606A | 公开(公告)日: | 2000-11-15 |
发明(设计)人: | C·J·阿恩岑;P·B·基普;R·库马;G·D·梅 | 申请(专利权)人: | 金默拉根有限公司 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;C12N15/84;C12N5/04;A01H4/00 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人: | 张广育,王其灏 |
地址: | 美国宾夕*** | 国省代码: | 暂无信息 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 混合 寡核苷酸 植物 实现 定点 遗传 改变 用途 | ||
1.一种在植物细胞靶基因上产生定点突变的方法,包括以下步骤:
a.将一种重组诱发性寡核碱基附着在一种颗粒上,该寡核碱基包括一个第一同源区,该同源区具有一个与靶基因的第一个片段的至少6个碱基对的序列相同的序列,和第二同源区,该同源区具有与所述靶基因的第二片段的至少6个碱基对的序列相同的序列,以及一个插入区,该区至少含有一个与所述靶基因不同源的核碱基,该插入区连接所述第一同源区和第二同源区;
b.将所述颗粒导入一群植物细胞的细胞中;
c.从所述细胞群中鉴定在所述靶基因的第一和第二片段之间具有一个突变的细胞。
2.如权利要求1的方法,所述重组诱发性寡核碱基是MDON,而每一个同源区含有至少6个RNA-型核苷酸的RNA片段。
3.如权利要求2的方法,其中,所述插入区的长度至少为3个核苷酸。
4.如权利要求2的方法,还包括培养鉴定的细胞以便产生植物的步骤。
5.如权利要求2的方法,其中,所述第一RNA片段含有至少8个连续的2’-取代核糖核苷酸。
6.如权利要求5的方法,其中,所述第二RNA片段含有至少8个连续的2’-取代核糖核苷酸。
7.如权利要求2的方法,其中,所述突变靶基因的序列与MDON的序列同源。
8.如权利要求2的方法,其中,所述附着步骤是在含有1.1-1.4M氯化钠和18-22μM亚精胺和至少14μg/ml MDON的溶液中进行的。
9.如权利要求2的方法,其中,所述靶基因是第一ALS基因,第二ALS基因,psbA基因,苏氨酸脱水酶基因,二氢2,6-吡啶二羧酸合酶基因,或S14/rp59基因。
10.如权利要求9的方法,其中,所述植物细胞是玉米、小麦、稻或莴苣细胞。
11.如权利要求9的方法,其中,所述植物细胞是马铃薯、番茄、油菜、大豆或棉花细胞。
12.如权利要求2的方法,其中,所述靶基因选自编码以下酶的基因:酸性转化酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶、多酚氧化酶、O-甲基转移酶、肉桂醇脱氢酶、etr-1或其同系物、ACC合酶和ACC氧化酶。
13.如权利要求12的方法,所述植物细胞源于玉米、小麦、稻或莴苣植物。
14.如权利要求12的方法,其中,所述植物细胞源于马铃薯、番茄、油菜、大豆或棉花植物。
15.如权利要求2的方法,还包括由所述植物或所述植物的后代生产种子。
16.一种在具有细胞壁的植物细胞靶基因上产生定点突变的方法包括以下步骤:
a.在一群植物细胞的细胞壁上开孔;
b.导入一种重组诱发性寡核碱基,该寡核碱基包括一个第一同源区,该同源区具有一个与靶基因的第一个片段的至少6个碱基对的序列相同的序列,和一个第二同源区,该同源区具有与所述靶基因的第二片段的至少6个碱基对的序列相同的序列,以及一个插入序列,该序列具有与所述靶基因不同源的至少一个核碱基,该插入区连接所述第一同源区和第二同源区;
c.从所述细胞群中鉴定在所述靶基因的第一和第二片段之间具有一个突变的细胞。
17.如权利要求16的方法,其中,所述重组诱发性寡核碱基是MDON,而每一个同源区含有一个至少有6个RNA-型核苷酸的RNA片段。
18.如权利要求17的方法,还包括培养鉴定的细胞以便产生植物的步骤。
19.如权利要求17的方法,其中,位于所述第一和第二片段之间的靶基因的序列与MDON的插入区的序列在一个错配核苷酸上不同,而所述靶基因的突变位于靠近所述错配核苷酸处。
20.如权利要求17的方法,其中,位于所述第一和第二片段之间的靶基因的序列与MDON的突变片段的序列在一个错配核苷酸处不同,而所述靶基因的突变位于所述错配核苷酸处。
21.如权利要求17的方法,其中,所述靶基因是第一ALS基因,第二ALS基因,psbA基因,苏氨酸脱水酶基因,二氢2,6-吡啶二羧酸合酶基因,或S14/rp59基因。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于金默拉根有限公司,未经金默拉根有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/98809867.9/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。