[发明专利]用于生产生物制品的细胞的制备

说明书

本发明涉及用于生产生物制品的细胞的制备方法。

对于生产基于，例如细胞系的生物制品，利用放大程序在生物反应器中制备大量细胞将是必要的。

美国专利5，017，490公开了这样一种放大程序，其特别具有降低转移污染风险的优点。然而，该方法不适用于依赖于贴壁的细胞(因此，不适合只有固定到基质上才生长的细胞)或者包埋入基质的细胞(例如，在多孔载体中)。

美国专利4，644，912公开了一种用于生产生物制品(即，病毒)的依赖于贴壁的细胞的制备方法，该方法从细胞工作种子开始，然后在1升、5升、25升、150升连续增加体积的生物反应器中进行传代，最后在1000升生物反应器中或大量的150升的生物反应器中。在所有这些传代步骤之间，均用蛋白酶稀释液使细胞从其载体上释放下来。在最后一代时，进行病毒接种。

假设平均细胞周期时间约20-24小时，传代间隔可能约3-5天。因此，为了使细胞从MWCS(生产商的工作细胞储备库)扩增到足够大量的培养物，根据终生物反应器的体积，总放大程序可能需要几周。

上述制备细胞的方法中，各种终生产批量必须从MWCS开始制备。对于巨大量生物制品的生产，需要利用几个平行的培养线直到最大容器体积。因此这种制备程序非常耗时，并为了制备细胞和制备生物制品需要相当大数目的生物反应器进行操作。

本发明的目的在于，在制备用于生产生物制品的细胞的过程中提供快得多的生产率。

因此，本发明涉及制备用于生产生物制品的细胞的方法，该方法为培养细胞达到所需的预生产批量的细胞容量，其后是重复的不连续过程：

a)部分预生产批量的细胞用于制备至少一个生产批量，和

b)其余部分预生产批量的细胞用作种子，以制备至少一个后续预生产批量。

更具体的是，本发明涉及制备用于生产生物制品的细胞的方法，该方法为培养细胞达到所需的预生产批量的细胞容量，其后是重复的不连续过程：

a)转移部分预生产批量的细胞，用于制备至少一个生产批量，和

b)转移其余部分预生产批量的细胞，用作种子制备至少一个后续预生产批量。

在本发明的一个优选实施方案中，从工作种子原种通过至少一步传代，制备第一预生产批量。

在本发明的进一步优选实施方案中，制备的细胞是依赖于贴壁的。在后一种情况下，通常需要使细胞在基质上生长。在每次重复过程中，当部分批量用于生产一个新批量时，另加入一定量的基质是可取的。在一个优选实施方案中，每次加入基质之前，首先使至少部分细胞从其原始基质上释放下来。

本发明使用的表示方法“生产批量”指用于生产生物制品的细胞培养物。

本发明使用的表示方法“预生产批量”指用在本发明方法中制备至少一个生产批量(如前面的定义)和一个后续预生产批量的细胞培养物。

本发明使用的表示方法“生物制品”指可以从细胞培养物生产的任何物质和有机体。“生物制品”的实例是病毒和蛋白质，例如酶。

本发明使用的表示方法“工作种子原种”指储藏用作种子的指定祖先的一定量某种类型的细胞，所有同样类型细胞的培养物来源于该种子。

本发明使用的表示方法“依赖于贴壁细胞”指其合适的生长和/或增殖需要附着于本发明定义的基质的细胞。

本发明使用的表示方法“基质”指用于吸附细胞的任何颗粒物质。

本发明使用的表示方法“传代步骤”指在细胞增殖和生产过程中的连续活动，包括至少将适当量细胞和适当量培养基转移到生产容器中，容器在适合细胞生长和增殖的条件下保温足以使细胞有效生长和增殖的一段时间。传代步骤经过足以使细胞有效生长和增殖的一段时间后，任选可以包括将细胞从培养基和/或从基质中分离。

本发明的方法与本领域已知的在连续过程而不是本发明的不连续过程中生产细胞的方法本质不同，这对本领域技术人员是显而易见的。按照专利公开文本EP0417531和WO89/08701，连续培养系统也可以用于生产病毒。首先，细胞在第一生物反应器中生长，达到一定细胞密度后，将细胞连续地从所述第一生物反应器加入第二生物反应器。在该第二生物反应器中，使病毒在细胞中生长，随后将这些病毒连续地从该第二生物反应器中撤出。

按照本发明，基本工作方法是使用母生物反应器，用来自其中的细胞装填生产生物反应器。如果细胞是依赖于贴壁的，在各传代步骤之后，优选需要使细胞从其基质上解吸附。