[发明专利]冷冻食品

说明书

发明技术领域

本发明涉及抗冻蛋白(AFP)和含AFP的冷冻食品。

发明背景

已经提出抗冻蛋白(AFP)用于改善食料的耐冻性。

对于本发明的目的，术语AFP的含义是本领域众所周知的，即这些蛋白显示抑制冰晶生长的活性。参见例如US5，118，792。

WO90/13571公开了化学生产或用重组DNA技术生产的抗冻肽。所述AFP适用于食品。

WO92/22581公开了可用于控制冰淇淋中的冰晶形状的得自植物的AFP。该文献也描述了通过用提取介质浸润叶子而不需要破裂所述植物从植物细胞外间隙提取多肽组合物的方法。

WO94/03617公开了从酵母生产AFP及其在冰淇淋方面的可能应用。WO96/11586描述了微生物生产的鱼AFP。

数个文献也讲述了分离和/或应用植物蛋白用于冷冻保护。冷冻保护蛋白的功能是保护植物膜抵抗霜害。然而，这些蛋白不具有重结晶抑制特性，因此不包含在所述术语AFP中。

Hincha在《植物生理学杂志》(Journal of Plant Physiology)，1992，140，236-240中描述了从甘蓝分离冷冻保护蛋白。Volger在Biochimicaet Biophysica Acta，412(1975)，335-349中描述了从菠菜分离冷冻保护的叶蛋白。Boothe在《植物生理学》(Plant Physiol)(1995)，108：759-803中描述了从欧洲油菜(Brassica napus)分离蛋白。此外，认为这些蛋白是冷冻保护蛋白而不是AFP。Neven在《植物分子生物学》(Plant Molecular Biology)21：291-305，1993中描述了菠菜冷冻保护蛋白的DNA特征鉴定。Salzman在Am.J.Eno1.Vitic.，第44卷，第4期，1993中的ASEV/东部地区的第18届年会的摘要和综述中描述了在葡萄属(Vitis)的芽中存在煮沸稳定的多肽。尽管所述蛋白类似于鱼抗冻肽，但是它们是冷冻保护蛋白而不是AFP。Lin在《生物化学生物物理研究通讯》(Biochemical and Biophysical ResearchCommunication)，第183卷，第3期，1992，第1103-1108和Lin在《植物生理学》(Plant Physiology)(1992)，99：519-525中描述了得自拟南芥属(Arabidopsis Hakaira)的15kDa冷冻保护多肽。Houde在《植物杂志》(The Plant Journal)(1995)8(4)，583-593中讲述了得自小麦的冷冻保护蛋白。然而，直到现在仍然未将AFP应用到市售食品。其原因之一是成本高和获得AFP的方法复杂。另一个原因是至今已经提出用于冷冻食品的AFP不能掺入标准配方混合料中，因为它们往往在加工过程中尤其是在巴氏消毒法步骤中变得不稳定。认为这种不稳定是由所述AFP变性引起的；这是在肽和蛋白质普遍观察到的众所周知的效应。

在我们非预公开的专利申请：WO98/4148中，已经描述了特别好的AFP可以从天然来源例如地衣属(Lichen)分离。

申请人现在已经能确定来自地衣属特别有效的AFP的部分氨基酸序列。

因此本发明涉及可以得自地衣属的AFP，所述AFP的表观分子量约为24kDa，而N末端的氨基酸序列为：A-P-A-W-M-D-A-E-S-F-G-A-I-A-H-G-G-L

具有与上述序列高度相似的序列的蛋白也包括在我们的发明范围内。对于本发明的目的，其氨基酸序列与上述序列至少80％重叠的所有RI活性蛋白也包括在本发明范围内。更优选重叠至少90％最优选重叠高于95％，例如与上述序列相同或仅有一个或二个氨基酸不同的氨基酸序列。

对于本发明的目的，两种(部分)氨基酸序列的重叠程度可以如下计算：

(a)对所述两种氨基酸序列进行序列对比并对相同并以相同顺序出现的氨基酸数(X)进行计数

(b)氨基酸的每个变化、缺失或添加变化记为1点，而总变化、缺失和添加记为(Y)。

(c)现在可以按X*100％/(X+Y)计算重叠度。