[发明专利]检测和诊断流感病毒的筛选方法

说明书

1．发明领域

本发明涉及筛选方法和试剂盒，以及用所述筛选方法和试剂盒检测和诊断流过病毒感染的方法。具体地讲，本发明涉及以用于检测流感神经氨酸酶的快速、特异性的检测系统为基础，用于检测和诊断流感病毒感染的筛选方法。本发明还包括以流感神经氨酸酶的种特异性检测为基础的用于诊断流感病毒感染的试剂盒。此外，本发明涉及快速、特异性的高通量检测系统以筛选与流感病毒神经氨酸酶相互作用并可用作抗病毒药物的试剂。

2．发明背景

2．1流感病毒感染

流感病毒感染是一种世界性的重要临床疾病。对流感已有数个世纪的了解，它是一种周期性发生的流行病，开始得很快，传播迅速，而且经常是世界性的。事实上，在历史上，流感曾引起最大的瘟疫之一；在1917至1918年间，约2千万人死于流感感染。尽管流行病是周期性发生的，但流感每年都爆发。仅在美国，每年约4千万人会受到流感的感染。在这些个体中，约15万人入院治疗，而1万至4万人死于流感或与流感有关的并发症(Welch，S1988，Gilead’s OralInfluenza Drug Proves Positive in Phase Ⅲ，BioWorld Today9∶1，3)。在美国，每年因流感病毒引起的治疗费用、生产力损失以及工资达约100亿美元。

流感是一种与全身症状有关的急性呼吸性疾病。这种疾病起因于由流感病毒感染引起的上呼吸道细胞层、气管和支气管的破坏、流感病毒进入鼻咽，随后扩散到表达特异性粘蛋白受体的细胞中。尽管病毒必须通过呼吸分泌物，呼吸分泌物含有病毒颗粒可结合的粘蛋白，但并不会阻断感染，因为病毒神经氨酸酶可水解粘蛋白，使其成为无效的抑制剂。

急性流感病毒感染导致病毒复制，随后被感染的细胞坏死以及呼吸道上皮大范围脱落。这直接引起与急性感染有关的呼吸症状。与急性流感病毒感染有关的全身症状包括发烧、寒战、全身性疼痛、头痛、虚脱和食欲缺乏。通常，因流感病毒感染引起的疾病是自限性的，持续3-7天。继发细菌感染(例如，金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和β溶血性链球菌)造成大部分因流感引起的死亡。仅因流感病毒感染引起的死亡很少见。2．2流感病毒

流感病毒是被膜病毒，含反义成片断的单链RNA基因组。流感病毒是正粘病毒科的成员。根据其核壳和M蛋白质抗原，将流感病毒进一步分成三型(属)，流感病毒A、B和C。A和B型流感病毒的新变体不断出现，根据免疫独特表面抗原、血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)糖蛋白的表达，将其分成亚型(种)。这两种表面抗原的抗原变异是由抗原性漂移引起的。有两种截然不同形式的抗原性漂移：小抗原性漂移和主要抗原性漂移。小抗原性漂移反映了因病毒的HA和NA基因突变而引起的改变。主要抗原性漂移产生于流感病毒的人与动物株之间的重组(即基因重新配对)。因此，在混合感染过程中，病毒可以重新配对基因并产生世界上大部分人无免疫力的新病毒种。

流感病毒粒子由一个含单链RNA基因组的内核糖核蛋白核心(螺旋核壳)和一个内层有基质蛋白(M)的外层脂蛋白被膜组成。A和B型流感病毒的成片段基因组由编码10个多肽的8个线性、负极性单链RNA组成(C型流感病毒是7个)，所述多肽包括：形成核壳的RNA指导的RNA聚合酶蛋白质(PB2、PB1和PA)和核蛋白(NP)；基质蛋白(M1，M2)；核外输蛋白；从脂蛋白被膜伸出的两个表面糖蛋白：(HA)和神经氨酸酶(NA)；和一个非结构蛋白(NS1)。在下表Ⅰ中总结了流感病毒的基因和其蛋白质产物。

表Ⅰ