[发明专利]用于高脂血症遗传治疗的方法和化合物

权利要求书

1．一种降低患者血液中LDL的方法，包括改变该患者肝细胞中的Apo B基因，以使被改变的Apo B基因的转录产物含有一个框内的终止密码子，籍此被改变的基因编码的蛋白具有至少1433个氨基酸且不超过3974个氨基酸。

2．如权利要求1中所述的方法，其进一步包括的步骤是确定在该患者体内Apo B基因的改变对LDL水平的影响以及随后调整改变的ApoB基因在该患者体内的数目。

3．如权利要求1中所述的方法，其中被改变的基因编码的蛋白具有至少1841个氨基酸且不超过2975个氨基酸。

4．如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中被改变的基因编码的蛋白具有序列编号1中的一个片段的序列，该片段至少具有1-1841个氨基酸且不超过1-2975个氨基酸。

5．如权利要求1-4中任一项所述的方法，其包括施用一种含有第一和第二同源区域的重组诱发剂寡核碱基，每个区域的序列至少有10个选自序列编号2的nt 4342-11913的核碱基，以此完成对Apo B基因的改变。

6．如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中的患者禁食LDL血清胆固醇降低到140mg/dl以下。

7．一种用于修饰人Apo B基因的含有一种寡核碱基的组合物，该寡核碱基包括：

a．第一和第二同源区域，每个区域的全长至少含有8个核碱基，总共的全长含有至少20个核碱基，这些同源区域均与序列编号2中的nt 5649-9051序列片段同源，以及

b．一个位于第一和第二同源区域之间的异源区域，

以使将异源区域的序列引入到Apo B基因中从而导致所编码的蛋白缩短。

8、如权利要求7中所述的组合物，其中的第一和第二同源区域各含有杂交双链的至少3个连续的核碱基对。

9．如权利要求7或8中所述的组合物，其中第一和第二同源区域的长度之和的全长不超过60个核碱基。

10．如权利要求7-9中任一项所述的组合物，其中的同源区域一起包括杂交双链的9至25个之间的核碱基对。

11．如权利要求7-10中任一所述的组合物，其中每个同源区域的GC含量(fraction)至少为33％。

12．如权利要求7-10中任一项所述的组合物，其中同源区域中的GC含量至少为50％。

13．如权利要求7-10中任一所述的组合物，其中寡核碱基的序列包括序列编号4-21或其互补序列中的任一的至少21个核碱基片段的序列。

14．如权利要求7-10中任一项所述的组合物，其中寡核碱基的序列包括序列编号4-21或其互补序列中的任一的至少25个核碱基片段的序列。

15．如权利要求7-14中任一项所述的组合物，其进一步包括：

a．水性；以及

b．一种选自下列一组中的大分子载体，该组包括

Ⅰ水核心的脂囊泡、其中的水核心含有寡核碱基

Ⅱ脂质微球体，其包括寡核碱基的亲脂盐，以及

Ⅲ一个平均分子量在500道尔顿到1.3Md之间的多聚阳离子，其中的多聚阳离子和寡核碱基形成盐。

16．如权利要求15中所述的组合物，其中的大分子载体进一步包括网格蛋白包被的凹陷受体的配基。

17．如权利要求16中所述的组合物，其中的网格蛋白包被的凹陷受体是选自转铁蛋白、烟碱酸、肉毒碱、胰岛素和胰岛素样生长因子-1的受体。

18．如权利要求16中所述的组合物，其中的网格蛋白包被的凹陷受体是一种脱唾液酸糖蛋白受体。

19．如权利要求15-18任一项所述的组合物，其中的大分子载体是带负电荷、水核心的脂囊泡。

20．如权利要求16-18任一项所述的组合物，其中的水核心脂囊泡进一步包括脑苷脂。

21．如权利要求15-20任一项所述的组合物，其中的水核心脂囊泡包括二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰丝氨酸。