[发明专利]一株突变的人乙型肝炎病毒株及其应用

说明书

在整个申请中，各种参考文献在括号内给出。这些出版物的公开内容作为本发明的参考文献在此全文引入，来更全面地描述本发明所属领域的现状。

发明背景

本发明涉及从肝细胞癌(HCC)中分离的、在主要表面抗原中的133位氨基酸残基处带有一个突变(变蛋氨酸为苏氨酸)的人乙型肝炎病毒基因组、它的核苷酸序列、推导的4种主要蛋白的氨基酸序列、抗原、抗体、检测系统、有效疫苗开发和抗病毒试剂。

HCC是最常见的人肝癌之一，尤其是在亚洲，每年占全世界新发现病例的70％。它通常由作为慢性肝病的并发症----肝硬化引起。HCC病人的临床表现是非特异性的症状，它们仅在癌症晚期出现。

慢性肝病的一个主要原因是乙型肝炎病毒感染，乙型肝炎病毒在1963年首次被发现是一种非胃肠道传播的人类病毒，HCC的血清学未定的致病原因中最为常见的是慢性乙型肝炎病毒感染。尽管乙型肝炎病毒并不显示完整的病毒致癌基因的特征，但其参与HCC的发展可归结为它与宿主肝细胞相互作用的各个方面。这包括最小病毒蛋白---X的混杂的转录活性，这种活性提高了许多细胞靶基因包括原癌基因的表达水平。在另一方面，在HCC病人中经常发现整合在宿主染色体中的病毒DNA。主要表面抗原也表现出在HCC的发展中起积极的作用。这种蛋白被用作检测乙型肝炎病毒携带者的主要检测标记。最具抗原性的决定簇是一个跨越23个氨基酸残基的高保守区域，它位于主要表面抗原的124至147位氨基酸位置。此小区被命名为群特异性决定簇“a”，它在乙型肝炎病毒基因组的所有亚型和分离株中均被发现。其抗原特性似乎来自其假设的双环结构，疫苗诱导的中和抗体就结合该结构。

我们的流行病学数据表明，在多数HCC病人中已发现了野生型主要表面抗原。而且，观察表明，来自HCC病人的几种主要表面抗原的变异体可能参与HCC的致病。直接测序分析表明，63个HCC病人中有24个(约38％)在主要表面抗原的“a”决定簇处携带有各种突变。当将野生型和变异体病例合并时，在位于主要表面抗原的“a”决定簇的第一个环的133位氨基酸残基处带有一个突变(变蛋氨酸为苏氨酸)的变异病毒的比例，在63个来自东南亚的HCC病人中高达12.7％，并存在于5个当地病例中。然而，在随机人群(多于100例)中的乙型肝炎病毒携带者仅2％发现有同样的突变。基于145位氨基酸残基变异(变甘氨酸为精氨酸)病毒的出现率为8％的事实，133位氨基酸残基变异体的意义在于突变率被进一步提高了。145位氨基酸残基的变异率在随机人群的乙型肝炎病毒携带者中保持恒定，众所周知该变异是一种疫苗诱导的突变体，位于“a”决定簇的第二个环。

虽然在HCC病人中的主要表面抗原的133位氨基酸残基处带有一个突变(变蛋氨酸为苏氨酸)的变异乙型肝炎病毒株比在疫苗接种后诱导的在主要表面抗原的145位氨基酸残基处带有一个突变的突变病毒可能有不同程度的增加，但此病毒株有着与后者相似的特征，即它们都具有稳定性，已经报道了这些病毒株垂直传播的病例，尽管使用了有效的乙型肝炎病毒预防和乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)。

在HCC中主要表面抗原的“a”决定簇中带有突变的变异人乙型肝炎病毒的出现值得重视。在主要表面抗原的133位氨基酸残基处带有一个取代物的突变病毒的高比例尤其值得注意，因为它可能指出了与HCC致病的密切相关性。这种相关性将因而急切需要开发特殊的检测系统以及有效的预防性和治疗性疫苗以及抗病毒试剂。测定这种突变病毒的核苷酸序列组成了达到这些目标的第1步，并且一定会为上述诊断和治疗方案的开发提供帮助。

发明简述

本发明提供一种被命名为人乙型肝炎病毒表面抗原-‘S’-133 Oon株(变蛋氨酸为苏氨酸)的乙型肝炎病毒分离株，其所组成的病毒基因组已于1997年12月15日在欧洲细胞培养物保藏中心保藏，登记号为P97121501、P97121502和P97121503。

本发明进一步提供编码如下一种多肽的分离核酸，其中所说多肽是乙型肝炎病毒株的一种突变的主要表面抗原，所说多肽具有的氨基酸序列与野生型乙型肝炎病毒的主要表面抗原的氨基酸序列不同，其差异在于所说多肽在位置133的氨基酸是苏氨酸而不是蛋氨酸。

本发明进一步提供一种制备多肽的方法和获得纯化形式多肽以便回收纯化形式多肽的方法，所说多肽是乙型肝炎病毒株的一种突变的主要表面抗原，所说多肽具有的氨基酸序列与野生型乙型肝炎病毒的主要表面抗原的氨基酸序列不同，其差异在于所说多肽在位置133的氨基酸是苏氨酸而不是蛋氨酸。