[发明专利]一种转基因植株的生产方法

说明书

本发明涉及转基因植株的生产方法。

棉花遗传转化技术是随着棉花组织和细胞培养的不断进步而发展起来的。自从Beasley(Beasely C A.1971..Bioscience.21：906-907)首次从陆地棉诱导出愈伤组织以来，棉花组织和细胞培养取得了一定的进展。现已建立了棉花组织(Beasely C A，et al.1973.American Journal of Botany.60：130-139，1974.American Journal of Botany.61：188-194；Stewart，1977，Planta.137：113-117，1981.Environmental andExperimental Botany 21：301-315；Bajaj，1986 Ind J ExpBiol.24：581-583；Gould，1991.Plant Cell Rep.10：12-16；Hemphill，1998.Plant Cell Rep.17：273-278)、细胞(Price，1977.Plant Science Letters.10：115-119，1979.Planta.145：305-307；Davidonis，1983.Plant Science Letters.32：89-93；Gawel，1986.Plant Cell Rep 5：457-459；Shoemaker，1986.Plant CellRep.5：178-181；Trolinder，1987.Plant Cell Rep.6：231-234；陈志贤，1987.中国农业科学.20(5)：6-11；Finer，1988.Plant CellRep.7：399-402)和原生质体(Firoozabady，1986.Plant Cell Rep5：127-131；陈志贤，1989.植物学报。31(12)：966-969；Peeters，1994.Plant Cell Rep.13：208-211)等培养系统，并进行了细胞分化、胚胎发生机理以及胚胎发生能力的遗传分析等相关研究(Trolinder，1988a.Plant Cell，Tissue and Organ Culture.12：31-42，1988b.Plant Cell，Tissue and Organ Culture.12：43-53；张献龙，1992.作物学报18(3)：176-181；张家明，1997中国农业科学30(3)：36-43)，为植物基因工程应用于棉花遗传改良打下了基础。

目前，棉花遗传转化主要是利用根农杆菌介导法进行的。1984年Horsch等首先建立根农杆菌介导的叶盘法转化植物技术体系，这种方法已被用于许多双子叶植物的遗传转化(Fraley，1986.CRC Critical Reviews inPlant Science.4：1-46)。用该方法转化棉花的报道最早见于1987年。Umbeck等(1987.Bio/Technology.5：263-266)首次采用该方法将新霉素磷酸转移酶基因(Npt-II)和氯霉素乙酰基转移酶基因(Cat)导入陆地棉栽培品种珂字棉312、310中。通过体细胞胚胎发生途径获得了含Npt-II和Cat基因的转化再生植株。同年，Firoozabady(1987.Plant.Mol.Biol.10：105-116)等进一步完善了转化再生技术体系，成功地将Npt-II基因和章鱼碱合成酶基因(Ocs)转入了陆地棉栽培品种珂字201。后来的研究更集中在将人们感兴趣的目的基因导入棉花。各国研究者们利用根农杆菌已分别将苏云金杆菌杀虫毒蛋白基因B.t.(Perlark，1990.Bio/Technology.8：939-943；Cousins，1991.Aust.J Plant Physiol.18：481-494)、豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI(王伟，1998.高技术通讯.8(5)：1-5)、2，4-D单氧化酶基因tfdA(Bayley，1992.Theor Appl Genet.83：645-649；Lyon，1993.TransgenicResearch.2：162-169)等导入了陆地棉。