[发明专利]口服免疫增强剂

说明书

本发明涉及能增强哺乳动物(最好是不包括人类的哺乳动物)、鱼类和甲壳动物免疫力的口服免疫增强剂。

众所周知，从低级动物到高级动物的各种动物中，构成微生物细胞壁主要成分的肽聚糖具有免疫强化特性。在海产品的水培领域已有许多专利申请提交。例如，日本Patent Publication for OppositionPurpse(此后称为“J.P.KOKOKU”)Hei 6-25067号公开预防刚断乳小猪腹泻感染的方法，其特征在于对三周龄小猪重复给予肽聚糖(胞壁酰二肽聚合物)。

然而，应指出当实际口服给予鱼类等胞壁酰二肽聚合物时，其免疫活性的表现不明显。其中，N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(胞壁酰二肽，MDP：分子量：492)属于胞壁酰二肽家族且已知具有免疫强化活性，但价格昂贵，其在饲养家畜业中的使用尚无法预测，尽管它在口服给予后具有激活巨噬细胞的令人乐观的效果。

本发明的目的是提供口服后能增强哺乳动物免疫力的免疫增强剂。

通过下列描述和实施例将使本发明的该目的和其它目的更为明显。

本发明的实现是建立在这样一种发现的基础上，即生物学活性根据构成肽聚糖(即胞壁酰二肽家族)的分子的分子量不同而变化，或者换言之，用酶如溶菌酶或蛋白酶处理微生物的细胞壁所获得的不大于10000的分子量的肽聚糖口服给予时表现出极佳的免疫增强作用。

即本发明提供含有基本不含胞壁酰二肽且分子量不大于10000的肽聚糖(PG)作为活性成分的口服免疫增强剂。

用于本发明中的基本不含胞壁酰二肽且分子量不大于10000的肽聚糖(PG)可以通过用酶如溶菌酶或蛋白酶处理芽孢杆菌属、短杆菌属、棒状杆菌属、埃希氏杆菌属、乳酸杆菌属、链球菌属、链霉菌属或双歧杆菌属微生物的细胞壁以除去分子量大于10000的部分而获得。

在本发明中，可以采用日本专利2526733号中第3栏34行至第四栏37行所述的微生物培养方法和细胞壁的分解方法，该公开结合在此作为参考。

在上述微生物中，优选使用芽孢杆菌属、短杆菌属和棒状杆菌属。

微生物细胞壁中含有的肽聚糖具有糖肽聚合物的一般结构，它是由两种糖即N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)和N-乙酰基胞壁酸(MurNAc)通过β-1,4-糖苷键接合的重复单位，及连接于重复单位上的含有四个氨基酸的肽链组成的。当使用(白蛋白)溶菌酶作为处理的酶时，它裂解MurNAc和GlcNAc的键，但不能断开MurNAc和GlcNAc之间的键，因此，通过这种处理获得的糖的最小单位为二糖。通常已知M-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(胞壁酰二肽，MDP；分子量：492)是具有免疫强化活性的肽聚糖的最小有效结构，但它不会形成。因此，优选用溶菌酶进行酶处理。

用所述酶处理的微生物细胞壁中的分子量不大于10000的部分可以通过已知的蛋白分子量分离等方法纯化，或者可以使用经所述酶处理后而不用纯化的含有该部分的产品。

尽管本发明的口服免疫增强剂优选只含有分子量不大于10000的肽聚糖(PG)且基本上不含胞壁酰二肽，它可以含有分子量大于10000的肽聚糖。不过，当其中含有大量的分子量大于10000的肽聚糖时，即使增加其剂量也不能获得足够的免疫强化作用。因此，含有分子量不大于10000的肽聚糖的量优选至少为肽聚糖总量的10％(重量)(此后称为“％”)，更优选为至少40％。如以下给出的实施例所示，令人吃惊的是，即使仅给予小鼠1mg含有约15％分子量不大于10000的肽聚糖的肽聚糖也能获得极佳的免疫增强作用，而即使给予20mg含有约1％分子量不大于10000的肽聚糖的肽聚糖也不能获得免疫增强作用。

用于本发明的所述肽聚糖的分子量不大于10000，优选500-10000，更优选500-4000。分子量可以通过凝胶过滤方法、光散射方法等确定。

在本发明中，已知具有免疫增强作用的分子量不大于10000、且基本上不含MDP的肽聚糖口服剂量优选至少为0.5mg/kg体重，更优选至少为1mg/kg体重。给予肽聚糖的动物包括哺乳动物(优选不包括人类)、鱼类和甲壳动物。

本发明的免疫增强剂可以直接口服给予所述动物或加入到待给予动物的食物中。

给药的时间并不特意限定。当将免疫增强剂给予鱼和甲壳动物时，在鱼苗期即开始给药可以获得其预防效果。

当把本发明的免疫增强剂加到食物中时，可将其掺入通常用于家畜饲养业或鱼类水培业的食物原料中，其量适当地根据动物或鱼类决定。