[发明专利]新型人肿瘤坏死因子突变蛋白及其制法和用途无效

专利信息
申请号: 99108110.2 申请日: 1999-05-20
公开(公告)号: CN1274729A 公开(公告)日: 2000-11-29
发明(设计)人: 陈常庆;刘惠 申请(专利权)人: 中国科学院上海生物工程研究中心
主分类号: C07K14/435 分类号: C07K14/435;C07K14/525;C12N15/10;C12N15/28;C12N15/63;C12N15/70;A61K38/17
代理公司: 上海专利商标事务所 代理人: 徐迅
地址: 20023*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 新型 肿瘤 坏死 因子 突变 蛋白 及其 制法 用途
【说明书】:

发明涉及基因工程、蛋白工程和疾病治疗领域,更具体地,涉及新的低毒的人肿瘤坏死因子突变蛋白及其制法,编码该突变蛋白的编码序列,含有编码序列的表达载体和转化的宿主细胞,以及含有该新型人肿瘤坏死因子突变蛋白的药物组合物。

人肿瘤坏死因子TNFα主要是由巨噬一单核细胞群产生的,可为卡介苗、内毒素等诱导产生;某些肿瘤细胞如人前髓白血病细胞HL-60在佛波醇酯诱导下,向巨噬细胞方向分化,也可产生TNFα。1984年,Pennica等(Pennica D,et al,Nature 1984;312:724)首先克隆了人TNFα基因cDNA,并推导出人TNFα分子由157个氨基酸组成,其中69和101位的两个半胱氨酸在TNFα的活性状态下形成一个二硫键,其分子量约为17KD。与此同时,M.Ikehara等(Ikehara M.et al,Proc Natl Ac ad Sci U.S.A.,1984;81:5956;Ikehara M.et al,Chem Pharm Bull,1988;36(1):291)也克隆了人TNFα基因cDNA。

国内外应用重组人TNFα临床试用的结果表明,该因子对多种恶性肿瘤细胞具有明显的杀伤作用,许多患者经过治疗后肿瘤缩小甚至消失,病人病情缓解,生活质量改善,生存期延长,显示出重组人TNFα良好的抗肿瘤作用效果。但在实际应用过程中,亦发现重组人TNFα具有十分明显的毒副反应如发热、寒战、低血压、体重下降等,故而限制了重组人TNFα的临床推广应用。

对人肿瘤坏死因子(hTNF-α)的研究表明,其最显著的特征是可以在体外或体内特异性杀伤多种肿瘤细胞而对正常组织细胞无明显毒副作用(WiedenmannB.,Reichardt P.,Rath U.et al.,“Phase-I trial of intravenous continuous infusion oftumor necrosis factor in advanced metastatic carcinomas”,J.CancerRes.Clin.Oncol.,1989,115(2):189-192;Hersh E.M.,Metch B.S.,Muggia F.M.et al.,“Phase II studies of recombinant human tumor necrosis factor alpha in patients withmalignant disease:A summary of southwest oncology group experience”,J.Immunother.,1991,10(6):426-431.)。但由于在实际应用中,hTNF-α的毒副作用较大,因而限制了它的临床使用(Old L.J.,Tumor Necrosis Factor:Structure,Mechanismof Action,Role in Disease and Therapy,1990,1-30,Karger,Pasel.)。

为此,众多研究人员都试图通过蛋白质工程的方法进行基因改造,以期得到高效、低毒的新型人肿瘤坏死因子。

Yamagishi等提出维持hTNF-α活力所必需的4个区域:I、30-32位氨基酸;II、82-89位氨基酸;III、115-117位氨基酸;IV、141-146位氨基酸(Yamagishi J.,Kawashima H.,Matsuo N.,et al.,Mutational analysis of structure-activity relationships in human tumor necrosis factor-alpha,Protein Engng,1990,3(8):713-719.)。

此外,南京大学白晨等发现68-73位这一区域缺失可降低hTNF-α的生物学活性和可溶性(Cen B.,Jin W.,Wu H.et al.,Glycine68 to histidine73 has an important role in the function of human tumor necrosis factor alpha,Biochem Mol Biolint.,1997,43(1):47-52.)。

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