[发明专利]一种新的人金属硫蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人金属硫蛋白L(Metallothionein-L，简称为“MTL”)的cDNA序列，该cDNA编码的蛋白是MT的异构体之一。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

金属硫蛋白(MT)是一个低分子量的、与重金属结合的蛋白家族，每个MT含有两个金属硫簇，能与7至12个重金属原子结合，其半胱氨酸含量高，并且不含芳香族氨基酸，分子量一般小于10kDa。MT广泛存在于动物和植物中，在原核生物中也有发现。在哺乳动物中，MT的半胱氨酸残基极度保守，通过硫醇键与锌、铜、钙、铬等重金属原子结合。在人中，至少有10到12个基因编码MT，这些基因被分为两类：MT-Ⅰ和MT-Ⅱ(分类标准是依据基因编码的蛋白在DEAE-纤维素上的洗脱位置，与结构或功能上的相似无必然联系)，MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大多数组织中表达。后来又发现MT-Ⅲ、MT-Ⅳ，分别只在脑和复层鳞状表皮中表达(Masters．B．A．et al Proc．Natl．Acad．Sci．USA．1994，91：584-588)。MT具有很强的可诱导性，可被金属、糖皮质激素、某些毒物、细胞因子及应激因素诱导合成(周杰昊等，1995．生理科学进展26：29-34)

MT能解毒金属，在发育过程中调节锌和铜的体内平衡，参与金属代谢和解毒，MT在消除自由基方面也有作用，在门克氏综合症(Menkes disease)、鼠花斑状表型、肝豆状核变性(Wilson’s disease)中，MT可能保护机体免受铜毒害。另外MT与某些抗肿瘤化疗药物，特别是顺二胺二氯铂(cDDP)相互作用，可减轻其细胞毒性。

MT的克隆工作开展顺利，在人中就有多个MT基因的异构体被克隆。1982年，Karin等人首先克隆到MT的cDNA序列(Karin，M．et al．1982，Nucl．Acid Res．10：3165-3173)。人MT-IIA(Karin，M．et al． 1982．Nature 299：797-802)、MT-IA(Richards，R．I．et al．1984．Cell 37：263-272)、MT-IE、MT-IF(Schmidt，C．J．etal．1985 J．Biol．Chem．260：3672-3675)的基因组序列也陆续分离克隆，还有人的一些假基因克隆工作(ψMT-IIB、ψMT-IC、ψMT-ID、ψMT-IG、ψMT-I、φMT-IH)也被报道。其他物种中的MT cDNA(小鼠MT-Ⅰ、大鼠MT-Ⅰ、猴MT-Ⅰ和MT-Ⅱ、中国仓鼠MT-Ⅰ和MT-Ⅱ、绵羊MT-Ⅰ)和基因组DNA(小鼠MT-Ⅰ和MT-Ⅱ)的克隆也进展顺利(see ref．Hamer，D．H．1986．Ann．Rev．Biochem．55：914-951)。

然而在本申请之前，还没有分离和公开过本发明的MTL。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸被命名为人金属硫蛋白L(human Metallothionein-L，简称为“人MTL”或“hMTL”)。

本发明的另一个目的是提供一种新的人MTL蛋白。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人的MTL多肽的方法。

本发明还提供了这种人的MTL核酸序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人MTL蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．3中从核苷酸35-220位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO．3中从核苷酸35-220位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO．4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO．3中从核苷酸35-220位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的人MTL蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO．4氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO．4序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有人MTL蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：