[发明专利]微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞用于制备用于治疗帕金森病药物的用途

说明书

本发明涉及动物细胞药物，更具体地说，涉及一种微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞悬浮液用于制备治疗帕金森病药物的用途。

帕金森病是一种常见的中、老年疾病，其主要病因是由于脑内多巴胺能神经元的功能减退，从而导致一系列临床症状。现有的药物治疗方法易产生抗药性及副作用。另一种治疗方法是向脑内移植多巴胺能细胞，以补充帕金森病人体内多巴胺类物质含量的不足，这种治疗方法已在动物和少数病人中取得明显效果。但多巴胺能细胞来源稀少而且容易引起免疫排斥反应，这两大难题限制了该技术的应用。现在常用的多巴胺能细胞有数种，它们各有其优缺点：(1)同种移植物虽然其免疫排斥反应小，但采用胚胎肾上腺髓质组织或脑黑质组织存在来源稀少和伦理学问题；采用成年帕金森病人自体肾上腺髓质组织存在肾上腺手术创伤对病人打击大和细胞功能差等问题。(2)采用微囊包裹的人嗜铬细胞瘤株PC12，虽能分泌多巴胺类物质，但移植肿瘤细胞存在令人担心的危险。(3)采用来源丰富的异种肾上腺髓质组织或脑黑质组织存在免疫排斥反应的问题。(4)转基因细胞目前尚难以稳定地获得，并且也存在免疫排斥反应的问题。目前，为克服组织细胞移植中免疫排斥反应而采用的免疫隔离技术有多种，例如大包囊、微胶囊、中空纤维管及灌流小室等，其中的微囊因体积小(小于1000μm)而利于细胞的存活和体内种植。制作微囊的材料有许多种，例如藻酸钠—聚赖氨酸--藻酸钠(简称APA)、琼脂糖、壳聚糖、脱乙酰几丁质、聚丙烯酰胺及羧甲基纤维素钠等，其中藻酸钠的生物相容性高、所形成的囊膜表面较光滑而有利于在动物体内长时间完好存在。实验已证明，APA微胶囊具有较好的免疫保护作用，其囊膜可截割大于11万Kd的分子(免疫球蛋白和免疫活性细胞不能穿过膜)，并且具有较好的生物相容性，在小、大动物体内可较长时间完好地存在。在胰岛、肝细胞、甲状旁腺和基因重组人生长激素分泌细胞移植治疗疾病模型动物的研究中已证明APA微囊膜具有保护异种移植物免受宿主体内免疫系统破坏的作用。但是，迄今为止，在国内外尚未发现采用APA微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞(简称BCC)悬浮液作为药物治疗帕金森病的报导。

本发明的目的是提供一种细胞来源广泛、不被免疫排斥、作用时间持久的APA微囊化动物细胞悬浮液用于制备治疗帕金森病的药物的用途。

本发明人针对上述现有技术的状况进行了深入研究，结果发现，采用下述技术方案即可达到上述目的，从而完成了本发明。

本发明的技术方案如下：

1、微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞悬浮液用于制备治疗帕金森病药物的用途，其中，所说的细胞悬浮液按下列步骤制成：

(1)将牛肾上腺髓质嗜铬细胞与一种浓度为10-20g/L的藻酸钠溶液混合，制成悬浮液，使每升悬浮液中含0.1-1×10¹⁰个细胞；

(2)利用喷雾装置将步骤(1)获得的悬浮液以150-1000μm直径的微滴状态分散于一种浓度为80-120mmol/L的氯化钙或乳酸钙溶液中，两种液体的比例为保证每升混合液含0.1-1×10⁸个细胞，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得含牛肾上腺髓质嗜铬细胞的藻酸钙珠沉淀；

(3)将步骤(2)获得的沉淀物加入到一种浓度为0.3-0.7g/L的聚赖氨酸溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

(4)将步骤(3)获得的沉淀物加入到一种浓度为1.0-2.0g/L的藻酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置3-15分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

(5)将步骤(4)获得的沉淀物加入到一种浓度为40-70mmol/L的柠檬酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞沉淀物；

(6)将步骤(5)获得的沉淀物加入到一种浓度为9g/L的氯化钠溶液清洗，最后将沉淀物转移入细胞培养液中培养并作为微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞悬浮液保存。

2、如第1项所述的微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞悬浮液用于制备治疗帕金森病药物的用途，其中，所说的牛肾上腺髓质嗜铬细胞优选具有80％以上的纯度。