[发明专利]用于治疗疼痛的微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞药物

说明书

本发明涉及动物细胞药物，更具体地说，涉及一种用于治疗疼痛的微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞药物。

疼痛是一种常见的可由多种病因引起的给病人带来极大痛苦的症状。现有的镇痛药物，如吗啡类，虽可在短时间内产生止痛效果，但反复用药后易产生抗药性及成瘾性。由于肾上腺髓质嗜铬细胞可分泌出某些与镇痛作用有关的物质，如甲啡肽、亮啡肽及单胺类物质等，如果将该嗜铬细胞植入人或动物的脊髓蛛网膜下，就可以象一个天然的“微型生物泵”那样，长期恒定地分泌出镇痛物质，而且不会产生抗药性及成瘾性。故在本世纪八十年代初，美国和瑞士的两个研究组尝试用同种(人、鼠)的肾上腺髓质组织和嗜铬细胞(chromaffin cell)移植入脊髓蛛网膜下内治疗疼痛，取得了满意的效果。但由于人类的肾上腺髓质组织和嗜铬细胞来源稀少，故在九十年代美国的研究组尝试用异种的牛肾上腺髓质嗜铬细胞(以下简称BCC)植入癌症病人的脊髓蛛网膜下以治疗癌痛。为了克服免疫排斥反应，他们采用长度为5cm、直径1mm的聚丙烯酰胺中空纤维管包裹BCC。由于中空纤维管壁膜孔只允许小分子的物质通过，所以BCC的分泌物可缓慢而且均匀地扩散出纤维管，发挥止痛作用，而宿主体内的大分子免疫球蛋白不能穿透管壁膜孔，因此使细胞能较长时间(一年左右)在宿主体内存活并不断地分泌止痛物质，从而对疼痛患者产生治疗作用。但是，中空纤维管的体积较大，一方面，由于其管内死腔大，因此影响了营养物和代谢物的扩散，使得管内细胞不易长期存活；另一方面，大体积的纤维管植入脊髓蛛网膜下易对脊髓神经产生刺激和压迫，从而产生许多对人体不利的副作用；此外，由于中空纤维管的体积大，植入脊髓蛛网膜下时必须采用外科手术的方法植入，给病人带来一定的损伤。同时，用脱乙酰几丁质、聚丙烯酰胺及羧甲基纤维素钠等材料(美国等使用)制作的中空纤维管的生物相容性较差，容易引起宿主体的组织反应。另一方面，采用藻酸钠-聚赖氨酸-藻酸钠制作的三层结构膜微胶囊(以下简称APA微胶囊)，其体积小(直径为200-1000um)、生物相容性高，利于微囊在动物体内长时间完好存在和囊内细胞较长期存活。实验已证明，APA微胶囊的囊膜可截割大于11万Kd(道尔顿)的分子，使免疫球蛋白和免疫活性细胞不能穿过该膜而进入囊内破坏其中的动物细胞，因而具有较好的免疫保护作用。实验亦显示出APA微胶囊具有较好的生物相容性，在小、大动物体内可较长时间(约1年半)完好存在。在胰岛、肝细胞、甲状旁腺和基因重组人生长激素分泌细胞移植治疗疾病模型动物的研究中，已证明具有保护异种移植物免受宿主免疫系统破坏的作用。但是，迄今为止，国内外尚未发现采用APA微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞作为药物用于治疗疼痛的报道。

本发明的目的是要提供一种生物相容性高、作用时间长、毒副作用小、操作简便的适用于治疗疼痛的APA微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞药物。

本发明人针对上述现有技术的状况进行了深入研究，结果发现，采用下述技术方案即可达到上述目的，从而完成了本发明。

本发明的技术方案如下：

1、用于治疗疼痛的微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞药物，其特征在于，该细胞药物按下列步骤制成：

(1)将牛肾上腺髓质嗜铬细胞与一种浓度为10-20g/L的藻酸钠溶液混合，制成悬浮液，使每升悬浮液中含0.1-1×10¹⁰个细胞；

(2)利用喷雾装置将步骤(1)获得的悬浮液以150-1000μm直径的微滴状态分散于一种浓度为80-120mmol/L的氯化钙或乳酸钙溶液中，两种液体的比例为保证每升混合液含0.1-1×10⁸个细胞，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得含牛肾上腺髓质嗜铬细胞的藻酸钙珠沉淀；

(3)将步骤(2)获得的沉淀物加入到一种浓度为0.3-0.7g/L的聚赖氨酸溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

(4)将步骤(3)获得的沉淀物加入到一种浓度为1.0-2.0g/L的藻酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置3-15分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

(5)将步骤(4)获得的沉淀物加入到一种浓度为40-70mmol/L的柠檬酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.2-2×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞沉淀物；