[发明专利]连续发酵工艺

权利要求书

1.一种用微生物发酵由D-山梨糖醇连续生产2-酮-L-古洛糖酸或其盐的工艺，其特征在于，一种包含D-山梨糖醇的营养培养基在第一个发酵容器中与一种能够将D-山梨糖醇转化为L-山梨糖的微生物温育，之后将所得到的包含L-山梨糖的发酵培养液转移至第二个发酵容器中与一种能够转化L-山梨糖成为2-酮-L-古洛糖酸的微生物温育。

2.根据权利要求1所述的工艺，其中，来自第一个发酵容器的发酵培养基在转移至第二个发酵容器之前经过灭菌。

3.根据权利要求2所述的工艺，其中，灭菌的实现是通过将发酵培养液在转移至第二个发酵容器之前在第一个发酵容器中加热至从约35至约121℃的温度，优选地从约45至80℃，或者通过在发酵培养液已经移出第一个发酵容器但在导入第二个发酵容器之前将其加热至同样温度。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的工艺，其中，包含D-山梨糖醇的营养培养基以高于包含L-山梨糖的发酵培养液从第一个发酵容器至第二个发酵容器的转移速率的速率加入到第一个发酵容器，而同时，包含所产生L-山梨糖的部分发酵培养液从第一个发酵容器灌注至一个独立的容器，这样以使第一个发酵容器中的发酵培养液的体积基本保持恒定。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的工艺，其中，在发酵过程中向第二个发酵容器加入营养培养基，根据从第一个发酵容器供给发酵培养液的速率和从第二个发酵容器流出的发酵培养液的速率，调节向第二个发酵容器供给营养培养基的速率，以使第二个发酵容器中的工作体积基本保持恒定。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的工艺，其中，能够转化D-山梨糖醇至L-山梨糖的微生物是葡糖杆菌或醋杆菌属的微生物，优选为弱氧化葡糖杆菌IFO 3291。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的工艺，其中，能够转化L-山梨糖至2-酮-L-古洛糖酸的微生物是氧化葡糖杆菌DSM 4025。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的工艺，其中，第一个发酵容器中的营养培养基中D-山梨糖醇的浓度是从约10克/升至约400克/升，优选从约150克/升至350克/升。

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的工艺，其中，L-山梨糖在加入到第二个发酵容器的发酵培养液中的浓度是从约5克/升至约200克/升，优选从约60克/升至180克/升。

10.根据权利要求1-9中任意一项所述的工艺，其中，第一个发酵容器中的培养是在约12至约38℃的温度下进行，优选地温度为从约18至约32℃，第二个发酵容器中的温度为从约20至约33℃。

11.根据权利要求1-10中任意一项所述的工艺，其中，第一个发酵容器中的培养是在营养培养基的pH值为约2.0至约9.0下进行，优选的pH为约3.0至约7.0，第二个发酵容器中培养液的pH值为约5.0至约9.0，优选的pH为约6.0至约8.0。

12.根据权利要求1-11中任意一项所述的工艺，其中，发酵以溶氧浓度为从约0.1至约200％空气饱和度下进行，第一个发酵容器中，优选的从约5至约100％空气饱和度，第二个发酵容器中，优选的从约8至约80％空气饱和度。

13.根据权利要求1-12中任意一项所述的工艺，其中，发酵以气流中氧浓度为从约0.1至约100％进行，第一个发酵容器中，优选的从约15至约100％，第二个发酵容器中，优选的从约19至约100％。

14.根据权利要求1-13中任意一项所述的工艺，其中，在第一个发酵容器中以气流速率从约0.01至约1.2体积/体积/分钟进行发酵，在第二个发酵容器中以气流速率从约0.03至约0.85体积/体积/分钟进行发酵。