[发明专利]羊、兔用免疫球蛋白注射液

说明书

本发明涉及应用生物技术制备动物生物制品。

动物病毒性传染病发病率与死亡率高达50-100％，疫苗对健康动物传染病的预防是根本，但对临床上一定比例发病群体的治疗至今是一个难题。免疫球蛋白的精制与浓缩在国内外仅限于微量或小型实验阶段，多为单一抗病毒免疫球蛋白。规范化、产业化浓缩与精制抗多病免疫球蛋白的制作工艺，在国内外几乎无一家涉足。目前，国内外浓缩、精制提取免疫球蛋白(Ig)主要采用：①．离心法；②．盐析沉淀法；③．分子筛法；④．有机物沉淀法，这四种方法均处于小中型试制阶段。

本发明采用羊、兔病毒(菌)抗原，接种单蹄兽动物后，诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白(俗称抗体或γ蛋白)。采取酶切技术切除免疫球蛋白结构中的Fc片段(无意义可结晶片段)，以防止对接种动物引起动物过敏性休克，保留其具有抗病毒与中和病毒的Fab片段(有意义病原结合片段)，通过盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白。因此，其制备免疫球蛋白的方法较以往的要简单、快速、易于掌握，提取回收率理想，经济效益可观，适于工业化制作。

本发明的优点：

1．制备免疫球胆蛋白所用的动物资源—关中大毛驴，较马匹等其它动物有疫病少，抗病力强，易于圈养，产浆量大，每月采两次血后，体质容易恢复，易于舍饲，对动物的变态反应低等优点，易于规范化、产业化生产生物制品。

2．本发明生物制品呈透明状液体，免疫球蛋白含量可检测、可量化。通过除菌器处理后，可在常温(2-10℃)存放两年，不析出、不沉淀、不变质。

3．制备方法中采用酶切-盐析法，使制剂中平均免疫球蛋白含量提高1-2倍左右，单位体积内的效价稳定。临床疗效显著，患病动物通过三天救治，基本上可康复，无后遗症，亦无毒副作用。对羊痘、羊快疫、羊肠毒血症、羊猝疽、羊黑疫、羊兰舌病等疫病的应急预防与紧急治疗，在发病初期，其治愈率达90％以上。对兔瘟(病毒性出血热)、兔巴氏杆菌病、兔魏氏梭菌病疫病的应急预防与紧急治疗与肉兔、种兔的长途运输抗病剂，在发病初期，其治愈率达95％以上。

本发明的技术方案：

采用羊痘、羊快疫、羊肠毒血症、羊猝疽、羊黑疫、羊兰舌病等病毒抗原；兔瘟(病毒性出血热)、兔巴氏杆菌、兔魏氏梭菌抗原，接种单蹄兽动物后，诱导其体液免疫系统产生高效价免疫球蛋白(俗称抗体或γ蛋白)。采取酶切技术切除免疫球蛋白结构中的Fc片段，以防止对接种动物引起动物过敏性休克，保留其具有抗病毒与中和病毒的Fab片段，通过盐析、滤过、压干、透析等生物技术精制免疫球蛋白。

本发明在制备方法中提供了以酶切与盐析相结合的新工艺，使单位体积内的效价提高2倍，既避免了异源血浆的变态性反应，又减少了提纯过程中免疫球蛋白的丢失(回收量由原来的1500g／10000mL提高到1800g／10000ml)。

本发明在制备方法中提供了对免疫动物的基础免疫与高度免疫的抗原组合比例配方(卡介苗／抗原：10mg／30ml)，以及接种时机(基础／强化／常规：3／4／7)与采血时机(13天)，这对充分利用供浆动物，加大采血次数、减少原料投入有一定的意义。

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明：

制作免疫球蛋白针剂时，(1)．采用羊痘、羊快疫、羊肠毒血症、羊猝疽、羊黑疫、羊兰舌病等病毒(菌)抗原；(2)．兔瘟(病毒性出血热)、兔巴氏杆菌病、兔魏氏梭菌病抗原，人工免疫接种关中大毛驴。

第一阶段基础免疫(6针)：对检疫合格的关中驴，方可免疫。免疫途径为颈背皮下或肌肉注射，一般注射抗原6次，间隔时间为3-4天。第一次注射抗原全量的1／4；第二次注射全量的1／3；第三次注射全量的1／3；第四次注射全量的1／2；第五次注射全量的1／2；第六次注射全量。于第六次注射后14天试血，测定免疫球蛋白效价，供以后强化免疫时参考。

第二阶段强化免疫(2针)：一般注射抗原2次(抗原30毫升／头·次)，间隔时间为3-4天。强化免疫后6-7天，即可大量采血(采血两次)。采血的毛驴休息半月后，即可进行下程常规高免。

常规高免(2针)：一般注射2次(抗原30毫升／头·次)，每次间隔9天(9±1天)。免疫结束的第六天进行第一次采血，隔日进行第二次采血。采血量为14-16ml／Kg体重，第二次采血较第一次减少约1／5，均由颈静脉采血。待采取的血液沉淀形成澄清黄层后，收集吸取血浆。

免疫球蛋白(Ig)的提纯：