[发明专利]用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂

说明书

本发明涉及血液学分析。

更具体地说，本发明涉及一种用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂。

血红蛋白浓度的测量和白细胞(尤其是特定的白细胞亚群)的测定，在人类医学和兽医学的特定病理学诊断中具有基本的重要性。

血红蛋白是一种含于血液红色血细胞(或红细胞)中的色蛋白。

于是血红蛋白浓度的测量需要应用细胞溶解试剂，它能进行红细胞或红色血细胞的溶胞，以便释放血红蛋白，这样就可测量血红蛋白。

为此，已知应用含有氰根离子的试剂，它可进行红细胞的溶胞，并将血红蛋白转化成稳定的色素原化合物，以便能够通过比色测量法测定血红蛋白。这类的一种试剂尤其被描述于美国专利3 874 852中。该试剂的主要缺点在于，它应用氰化物。此外，它不能使鉴定和定量分析含于待分析的血样中的白细胞亚群成为可能。

事实上，白细胞亚群(尤其淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)的测定，在特定病理学的鉴定方面具有基本的重要性。

现有技术中人们已提出了不含氰化物的各种试剂，用于血样中白细胞的测定。

这类试剂的实例描述于例如文献EP 0 325 710中。

虽然这些试剂具有不应用氰化物的优点，但它们具有这一缺点，即它们不能准确鉴定和定量分析血液中的白细胞亚群。

因此，EP 0 325 710的试剂例如使得可能测定血样中存在的嗜酸性粒细胞，但不能准确地鉴定其它每种白细胞亚群。

此外，文献EP 0 424 871描述了能够鉴别白细胞亚群的试剂。然而，这些试剂有时在克服存在于人病理学和兽医生物学中的膜抗性时遇到困难。

本发明的目的尤其是消除前述缺点。

具体地说，本发明的目的是提供一种血液学分析试剂，该试剂用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定，它尤其使红细胞或红色血细胞的溶胞以及血红蛋白的测量成为可能，但未应用氰化物。

本发明的目的还在于提供一种这类试剂，它使得有可能定量分析总的白细胞或白色血细胞，鉴定至少一种白细胞亚群，以及定量分析至少一种白细胞亚群。

本发明的目的还在于提供一种这类试剂，这可被用于人类医学和兽医学中。

此外，本发明的目的是提供一种这类试剂，它能消除与人病理学和兽医生物学中遇到的膜抗性相关的分析问题。

为此，本发明提出了一种上述类型的试剂，它包括：

-至少一种阳离子型去污剂；

-一种糖苷型化合物，尤其是皂苷；

-至少一种无机盐和/或一种渗透剂和/或白细胞保护剂；以及

-一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂，该缓冲剂能选择性地调节所述试剂的pH或者至大体上中性值(pH为5～8)，或者至碱性值(pH为8～12)。

于是，本发明的血液学试剂包括至少四种主要组分，它们使得有可能实现上述目的。

该阳离子型去污剂起溶解红色血细胞或红细胞的作用，使得有可能释放血红蛋白，于是可通过吸光度测量而测定它。

(阴离子的和阳离子的)离子型去污剂主要被用于解离蛋白质复合体，并溶解膜的蛋白质。它们是所谓的变性。

此外，它们对血液的细胞群(红细胞和白细胞)具有迅速的和非专一性的作用。

糖苷型化合物(尤其是皂苷)有助于红色血细胞的溶胞作用。此外，它起有关血红蛋白稳定的作用，这使得有可能在特定的波长下分析血红蛋白；尤其是该化合物可破坏红色血细胞的抗性膜。

皂苷(也称为saponosides)是具有专一性地溶解红细胞的能力的糖苷，但该溶胞作用比离子型去污剂存在下获得的溶胞作用慢。当将皂苷与其它去污剂一起应用时，它们使得有可能达到红细胞的更快速、更专一性的溶胞，这就限制了白细胞的变质。

此外，这类化合物的化学结构(其特征在于多环碳网络)使得保持血红蛋白的氧化衍生物的物理稳定性和化学稳定性。

无机盐干预去污剂的活性。此外，又需要它以便能通过抗性进行测量。

将该试剂在中性pH下应用时，所述渗透剂大体上起白细胞保护作用，以便有助于鉴别白细胞亚群。

最后，所述缓冲剂是一种关键成分，因为该试剂的pH是一个重要特征。实际上，根据pH值，该试剂能鉴定一种或多种白细胞亚群。

当该试剂的pH被调节到大体上中性值(pH为5～8)时，可能定量分析和鉴定下列三种白细胞亚群：淋巴细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞。

当该试剂的pH被调节到碱性值(pH为8～12)时，它另外还使得可能鉴定多核嗜酸性粒细胞。