[发明专利]生物菌剂及制备方法

说明书

本发明属于农业应用微生物技术领域，尤其涉及的是一种多株菌混合发酵制成的生物菌剂及制备方法。

现代农业依赖化肥，但化肥的利用率低于40％，更多的化肥经淋溶(损失约10％)、地面冲刷(损失约15％)、挥发(损失约20％)及反硝化脱氮(损失约15％)等进入土壤及周围环境，造成多种不良后果：一是给人类带来许多严重的污染问题；二是农作物特别是瓜果、蔬菜等品质显著下降；三是土壤板结，无机养分不易分解，造成地力下降。后者又迫使农民年复一年的加大化肥用量，不仅费用加大，而且加重了上述弊端，形成了恶性循环。

本发明的目的旨在提供一种防止土地板结，保护自然生态环境，促进农业大幅度增产，防止病虫害，为生产优质绿色食品创造条件的微生物肥料及制备方法。

本发明的技术方案是：制备方法中所使用的八株菌种均来自国家菌库，具体如下：

1、固   氮   菌  (AS.1.222 Azotobater)、

2、巨大芽孢杆菌  (AS.1.151 Bacillus megaterium de Bary)、

3、胶冻样芽孢杆菌(AS.1.153 Bacillus mucilaginosus)、

4、枯草芽孢杆菌  (AS.1.108 Bacillus subtilis)、

5、产黄纤维单胞菌(AS.1.102 Cellulomonas flaxigera)、

6、荧光假单胞菌  (AS.1.867 Pseudomonas fluorescens)、

7、恶臭假单胞菌  (AS.1.870 Pseudomonas putida)、

8、苏云金芽孢杆菌松躅亚种(AS.1.294 Bacillus thuringiensis)。

生产工艺路线：首先，八株菌种分别经原始菌种→斜面菌种→三角瓶摇床深层发酵三步工艺制成所需要的扩大菌种，其中，各种斜面培养基配比如下：

(1)固氮菌斜面培养基配比：KH₂PO₄ 0.1—0.4克、K₂HPO₄ 0.5—1.2克、MgSO₄·7H₂O 0.05—0.4克、CaSO₄·2H₂O 0.005—0.02克、FeCl₃微量、Na₂MoO₄·2H₂O微量、酵母膏0.2—0.8克、甘露醇15—25克、琼脂18—25克、葡萄糖2％、PH7.2的蒸馏水1升，灭菌121℃/30min，培养温度30℃。

(2)巨大芽孢杆菌斜面培养基配比：蛋白胨4—6克、牛肉膏2—4克、NaCl4—6克、琼脂18—25克、PH7.0—7.1的水1升，灭菌121℃/30min。

(3)胶冻样芽孢杆菌斜面培养基配比同上。

(4)枯草芽孢杆菌斜面培养基配比同上。

(5)产黄纤维单胞菌斜面培养基配比：NaCl4—8克、MgSO₄·7H₂O 0.05—0.2克、KH₂PO₄ 0.4—0.6克、CaCl₂ 0.05—0.2克、K₂HPO₄ 1—3克、(NH₄)₂SO₄ 1—4克、酵母膏0.5—2克、滤纸条1片、PH7.0—7.5的蒸馏水1升、灭菌121℃/30min。

(6)荧光假单胞菌斜面培养基配比同(2)。

(7)恶臭假单胞菌斜面培养基配比同上。

(8)苏云金芽孢杆菌松躅亚种斜面培养基配比同上。

各种生产菌的三角瓶摇床发酵培养基配比同斜面培养基配比减去琼脂即可。

第三步三角瓶摇床深层发酵的温度为30℃，时间是48小时。

然后，把经过深层发酵的八株菌种混合再经过一级种子罐发酵→二级种子罐发酵→三级种子罐发酵→四级种子罐发酵四步工艺，最后第四级发酵罐放罐标准含菌数为20—150×10⁸个/ml。其中四步发酵工艺的参数如下：

(1)发酵温度：30℃±1℃；

(2)PH：7.0—7.2；

(3)无菌空气通入量：M³/min；

(4)发酵时间：连续48小时；