[发明专利]深层培养巴西磨菇菌丝体提取多糖蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种多糖蛋白的提取方法，确切地说是公开了一种深层培养巴西蘑菇菌丝体提取多糖蛋白的方法。

巴西蘑菇是原产于巴西的食用菌，学名为Agaricus blazci Murrill，目前，应用巴西蘑菇子实体提取的抗癌性多糖蛋白，一直受到栽培条件的限制，不便于规模工业化生产，产品具有菇类的异味，易受二氧化硫的污染，使产品不合格，严重影响了产品的质量。

本发明公开了一种深层培养巴西蘑菇菌丝体提取多糖蛋白的方法，目的旨在解决其规模工业化生产的问题。

针对本发明的目的，采用的解决技术方案是：利用发酵工程在生物反应器内用无菌液体培养基，接入巴西蘑菇Agaricus blazci Murrill菌种，供给无菌空气，保持合适的温度，进行深层培养，得到巴西蘑菇菌丝体和巴西蘑菇菌丝培养液，再从菌丝体和巴西蘑菇菌丝培养液中分别提取多糖蛋白，具体工艺如下：

1、取葡萄糖3～5％、蛋白胨0.03～0.05％及水配制成液体培养基，经120℃温度下压力1.5kg/cm²实罐灭菌30分钟，冷却至30℃条件下，接入巴西蘑菇(Agaricus blazci Murrill)菌种，通入无菌空气，通气量为1∶0.5/v/v，培养2～4周，中间补充20％液体培养基，得到巴西蘑菇菌丝培养液和巴西蘑菇菌丝体，巴西蘑菇菌丝体呈球状物。

2、将上述培养的菌丝体培养液真空浓缩至原体积的1/3，加入体积1～3倍量的乙醇，沉淀24小时，离心取沉淀物，真空干燥，既得多糖蛋白粉。

3、将所得的巴西蘑菇菌丝体加入其体积6～10倍量的水，经100℃加热提取3小时，过滤后再将滤液浓缩至原体积的1/3，再加入其体积1～3倍量的乙醇，醇析沉淀24小时，取沉淀物在真空条件下干燥70℃，即得多糖蛋白干粉。

本发明的积极效果在于：采用发酵工程深层培养巴西蘑菇，不受栽培条件、自然、地理环境、气候季节的影响，大规模的利用发酵设备工业化生产多糖蛋白，本发明产品为水溶性棕灰色干粉，含有葡聚糖和蛋白质，具有多糖特征的红外吸收光谱，产品无异味、无毒、无污染、口服安全有效，具有极好的抗癌效果，经小鼠S-180抗肿瘤试验，抑瘤率为66～86％，免疫性研究表明本产品可活化、激

活巨噬细胞，增强巨噬细胞功能，可开发成抗癌药物和抗癌保健食品。

下面结合实施例进一步说明本发明：

实施例1

a、取葡萄糖5％、蛋白胨0.05％及水配制成液体培养基500立升，经120℃压力1.5kg/cm²实罐灭菌30分钟，冷却至28℃，将巴西蘑菇菌种50立升接种到该液体培养基上，通入无菌空气，温度保持28℃，培养18天，中间补充一次液体培养基100立升，得到巴西蘑菇菌丝体30kg及巴西蘑菇培养液300立升；

b、将得到的巴西蘑菇菌丝体30kg，加180kg的水，经100℃加热提取3小时，过滤后再将滤液浓缩至原体积的1/3，再加三倍体积的乙醇，醇析沉淀24小时，取沉淀物在真空条件下70℃干燥，得多糖蛋白干粉60克；

c、将得到的液体培养基300立升真空浓缩至100立升，加入150立升乙醇，醇析24小时，经2000rmp/min离心15分钟，取沉淀物真空干燥，得多糖蛋白干粉265克，本品为水溶性棕灰色干粉，无异味。

实施例2

a、取葡萄糖5％、酵母膏0.05％及水配制的液体培养基300立升，接种巴西蘑菇菌种30立升，通入无菌空气，保持25～30℃温度，培养21天，得到巴西蘑菇菌丝体25kg和培养液150立升；

b、取上述的菌丝体25kg加水250kg，加热100℃提取3小时，过滤后再将滤液浓缩至100kg，加300kg的乙醇，醇析沉淀24小时，取沉淀物在真空条件下70℃干燥，得多糖蛋白干粉40克；

c、将得到的培养液150立升真空浓缩至50立升时，加入150立升的乙醇，上离心机2500rmp离心20分钟，取沉淀物在真空条件下干燥，得多糖蛋白干粉225克。