[发明专利]人、猪共患囊虫病核酸疫苗

说明书

本发明涉及生物技术领域，是一种人、猪共患囊虫病核酸疫苗，特别是由猪带绦虫囊尾蚴保护性抗原基因以及相关细胞因子基因组成的真核生物表达质粒作为具有预防及治疗人、猪共患囊虫病功能的核酸疫苗。

猪带绦虫囊虫病是我国主要的人畜共患病之一，在我国大部分省、市、自治区有着广泛流行区域，特别在华北、东北、西北地区流行十分严重。不仅对养猪业造成了巨大的经济损失，而且直接威胁着广大人民群众的身体健康。由于猪带绦虫及其囊尾蚴的体积较大、结构复杂、生活史伴有宿主转换、体内移行、发育阶段高度变态以及寄生部位多变等特点，决定了宿主的免疫应答相应表现为极其复杂的连锁过程，给囊虫病的预防带来了很大困难。有关囊虫病的免疫保护性研究，目前国内尚未见有意义的报道，国际上仅报道从虫体中提取粗抗原，分离其中一种或几种抗原成分，免疫动物后可检测到一定程度的体液免疫反应(Evans-CA，et al.Immunotherapy for porcine cysticercosis：implications for prevention of human disease.Cysticercosis working Group in Peru.Am-J-Trop-Med-Hyg 1997；56(1)：33-7.Molinari-JL，et al.Field trial for reducing porcine Teania solium cystcercosis in Mexico bv systematic vaccination ofpigs.Vet-Parasitol 1997；69(1-2)：55-63.)，但由于其成分复杂，交叉反应严重且抗原量少，其诊断及预防价值均十分有限。虽然，利用基因工程技术可获得大量的高纯度的亚单位疫苗，并可诱发被免疫动物较强的体液反应(Johnson-KS，et al.Vaccination against ovine cysticercosisusing a defined reconmbinant antigen.Nature 1989；338(6216)：585-7.)，但是，蛋白纯化工艺十分复杂，成本较高，且对单一抗原的体液免疫应答仍难以对复杂的囊虫感染产生十分有效的保护作用。

核酸疫苗作为继减毒、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗，正在成为一个新的研究热点。其基本过程是把抗原基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA通过某种方式导入动物体内，使外源抗原基因在活体内表达，激活机体免疫系统、诱发免疫应答反应。其优点是：(1)能诱发体液及细胞全方位免疫应答；(2)能针对多种抗原构建多价疫苗进行多级免疫，使免疫保护更全面；(3)安全性好；(4)免疫保护效果长；(5)生产简便、成本低廉、稳定性好且贮运方便。虽然有学者报道用肥头绦虫的某一抗原基因构建了核酸疫苗(Gabriela Rosas，et al.J.Parasitol.84(3)，p516-523，1998)，但未见人、猪共患猪带绦虫囊虫病核酸疫苗的研究报道。

本发明的目的是提供一种具有广谱、长效、简便、全方位诱导免疫反应等特点的囊虫病核酸疫苗。

本发明用以构建真核表达载体的基本骨架为pcDNA3(购自Invitrogen公司，其序列和物理图谱见该公司的产品目录)；构建过程以及制备过程中，质粒扩增所用的宿主菌为DH10B(购自GIBCO公司)；插入的外源基因为：猪带绦虫囊尾蚴的三种保护性抗原基因(cC1、cC3、cC4)、细胞因子基因猪γ干扰素(IFN-γ)和猪白细胞介素5(IL-5)，其基因结构分述如下：

(1)猪带绦虫囊尾蚴的保护性抗原基因cC1

   a)序列特征：

     长度：1300bp

     类型：核酸

     链数：双链

     几何结构：线性

   b)分子类型：cDNA

   c)来源：猪带绦虫囊尾蚴