[发明专利]一种新的多肽—人IKappaB激酶和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人Ikappa B激酶，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞因子IL-1和TNF以及造血细胞生长因子等在细胞中通过改变基因的表达而产生多样的生物学活性，而这些活性的转变就是主要由转录因子NF-．kappa．B来完成的。与其它转录因子不同的是，在未被细胞因子刺激的细胞中，NF-kappa B位于在胞浆中，与其抑制分子-I．Kappa．B蛋白形成复合物而处于失活状态；在诱导因子(如细胞因子、生长因子、淋巴因子、紫外线、药物或应激等)作用下，I．Kappa．B蛋白特殊部位的丝氨酸残基被磷酸化，尤其是位于保守序列DSGL／IXSM／L上的两个丝氨酸残基(I．Kappa．Bα的32和36位或I．Kappa．Bβ的19和23位的丝氨酸)被磷酸化后，被泛素系统所识别并通过26S蛋白质体而降解，从而释放出NF-kappa B，后者进入细胞核后激活特定基因的转录，这些基因编码的蛋白参与调控炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、干细胞的分化等多种生物学功能[Ghosh S．&Baltimore D．Nature 1990；344，678-682．]。近年来，已克隆到7个NF kappa B的同源蛋白，这些蛋白与REV病毒的转化成份有高度同源，因而又称为Rev家族。目前认为，NF kappaB是一个癌基因[VermaIM．Genes Dev．1995；9，2723-2735]。当使用化学疗法或放射治疗来杀死癌细胞时，NF-．kappa．B便会活化，使肿瘤细胞逃过死亡；当身体对疗法产生抵抗力后，癌细胞便可以继续繁殖。I．Kappa．B能与NF-．kappa．B结合，试验证明放、化疗后，老鼠体内肿瘤会缩小直至完全消失。

I kappa B被激酶所磷酸化进而发生降解是NF kappa B活化的关键步骤[VermaIM．Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1997；11758-11760]。目前已知的I kappa B激酶有IKK-1和IKK-2。IKK-1是一个由745个氨基酸残基组成的蛋白，其N-端含有一个丝氨酸／苏氨酸催化功能域，中间是一个亮氨酸拉链样的疏水性螺旋，C-端有一个螺旋-环-螺旋功能域。IKK-2为含有756个氨基酸的蛋白，与IKK-1有相似的结构。研究表明，IKK-1和IKK-2共同转染Hela或293细胞可导致NF kappaB的磷酸化，但大肠杆菌表达的IKK-1或IKK-2不能在体外使NF kappa B磷酸化，提示IKK-1或IKK-2可能是真正的NF kappa B激酶的上游因子。寻找新的NF kappa B激酶成分对于进一步了解NF kappa B的生物学功能有重要的作用。另外，由于I kappa B激酶与丝裂原相关的激酶或Jun激酶无明显相同，IKK可能代表了一类新的激酶信号传导途径。新的IKK类激酶或蛋白有待进一步发现。

本发明提供了一种IKK类激酶满足了这方面的要求。

本发明的目的是提供一种新的人I kappa B激酶(I Kappa B Kinase-3，IKK-3)以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的IKK-3多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少95％相同性：(a)编码上述人IKK-3多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中32-592位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2861位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。