[发明专利]一种新的多肽－人溴基功能域蛋白72和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人溴基功能域蛋白72，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

组蛋白氨基末端修饰是染色体转录后调控的一种重要方式，它决定了基因被激活的程度。已发现有许多蛋白涉及这一调控方式。越来越多的证据表明，这类激活因子大多有组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性，如酵母的Gcn5P、人的pCAF和CBP／P300蛋白。而这一系列具有HAT活性的激活因子的显著特征就是在羧基端含有溴基功能域(Bromodomain，简称Brd)，这是一个约含110个氨基酸残基的功能域(Haynes SR et al Nucleic Acids Res．1992，20：2693-2693)。研究表明，含Brd的Gcn5P蛋白能与组蛋白3和4的氨基末端结合，而缺失Brd的Gcn5P蛋白则不能结合，并且仅含Brd的较短的多肽片段也能与组蛋白3、4结合。缺失实验表明，与组蛋白4结合的位点是第19位或第23位的精氨酸(Ornaghi Petal J．Mol．Biol．1999，287：1-7)。Brd对于HAT的活性具有决定性的作用。人Gcn5P蛋白的HAT活性能被DNA依赖的蛋白激酶所抑制，这是通过磷酸化Gcn5P蛋白来实现的。而DNA依赖的蛋白激酶对Gcn5P蛋白的磷酸化离不开Brd与Ku抗原的结合(Nickolai A et al Mol．Cellu．Biol．1998，18(3)：1349-1358)。

由此可知含有Brd的蛋白通过与组蛋白氨基末端相结合，从而对组蛋白进行乙酰化修饰，激活基因的表达，因此这含有溴基功能域的HBP在基因调控方面起着重要作用。

由于此含有溴基功能域的HBP在调控基因表达方面起着重要作用，因此在抑制肿瘤生长及肿瘤的治疗方面有着广阔的前景。例如含有Brd的hbrm／BRG-1蛋白能与RB蛋白一起与S期诱导转录因子E2F1相结合，抑制其活性，使细胞停止于G1期，从而抑制细胞增殖，研究表明Brd在此过程中是必不可少的(TroucheD et al．Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1997，99：11268-11273)。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人溴基功能域蛋白72以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人溴基功能域蛋白72的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人溴基功能域蛋白72的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人溴基功能域蛋白72的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人溴基功能域蛋白72的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人溴基功能域蛋白72的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人溴基功能域蛋白72异常相关的疾病的方法。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的人溴基功能域蛋白72，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少89％相同性：(a)编码上述人溴基功能域蛋白72的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中6-1961位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2136位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

如本发明所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。