[发明专利]土霉素纯化方法

说明书

本发明涉及一种土霉素纯化方法。具体地说就是采用酸碱法进行重结晶，其中加净化剂和膜过滤进行纯化的方法。

作为兽药，土霉素碱注射液(特效米先)由于其刺激小，在国内外得到广泛应用。该注射液制备时，国内厂家多采用卫生部标准WS₁-C₂-001-89的普通土霉素碱为原料。由于原料杂质含量较高，并含有相当量的细菌和细菌内毒素，制得成品细菌和热源难以控制，稳定性也较差。欧美国家的厂家现多采用经纯化后的“注射级”土霉素原料，克服了上述缺点。目前国内尚未见有关土霉素纯化方法的报道，国外曾报道用醋酸丙酮进行纯化的方法，此技术已由美国专利US5387703公开。

本发明的目的是提供一种土霉素纯化方法，用此法可得到符合英国药典和美国药典现行版要求的，具有较高含量、较低杂质吸收度、无菌、细菌内毒素检查合乎要求的土霉素原料。

在达到上述目的中，本发明提供了一种土霉素纯化方法，此法包括先将土霉素溶解在含有盐酸和另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸的混合水溶液中，用碱回调使pH值在1.40-1.70之间，加入净化剂黄血盐钠和硫酸锌，而后用5-10万分子量超滤膜过滤除去净化剂及其吸附的杂质，再用6000-10000分子量超滤膜除菌、除热源，最后按无菌操作要求，稀释加碱调pH结晶，经分离、干燥得到成品。

本方法中所用土霉素碱原料应符合英国药典98版要求，溶解浓度一般在30000-80000u/ml之间，溶解温度为23-30℃，溶解时间为30分钟。

本方法所用酸溶液包括盐酸(分析纯或化学纯)和另外一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸(分析纯或化学纯)的混合水溶液。盐酸浓度为0.15-0.25mol/L；另一种在pH2.8-4.0有缓冲作用的酸可用磷酸、乳酸或枸橼酸等，浓度为0.05-0.20mol/L。用盐酸有助于土霉素尽快溶解，而另外一种酸在结晶时能保证得到较好的晶形。

本方法回调用碱为氢氧化钠或氨水，均为分析纯或化学纯，加入时浓度为1-3mol/L，回调pH值控制在1.40-1.70之间。回调目的是保证土霉素溶液处于一相对温和的pH环境，便于后步操作，但回调pH不可过高，否则过滤前土霉素会从溶液中析出。

本方法所用净化剂为黄血盐钠和硫酸锌，黄血盐钠和硫酸锌在水溶液中反应形成亚铁氰化锌钠胶状沉淀，这种沉淀可吸附溶液中的有色蛋白杂质，从而达到净化的目的。黄血盐钠符合GB6708-86的要求，硫酸锌符合HG/T2326-92的要求。二者用量均为土霉素碱重量的2-4％。操作时分别用10倍量的水溶解，而后在搅拌下分别加入二溶液，纯化40-60分钟后过滤。

本方法采用5-10万分子量聚砜材质中空纤维超滤膜除去净化剂及其吸附杂质，同时也可达到除菌的目的，采用6000-10000分子量超滤膜可除去细菌内毒素。

本方法利用土霉素两性化合物的性质，加碱调pH接近其等电点而结晶。所用碱为分析纯或化学纯的氢氧化钠，加入时浓度1-3mol/L，同时碱溶液中加入3‰浓度的亚硫酸钠，在向结晶液中加入时释放二氧化硫对结晶起到漂白作用。结晶液浓度为10000-15000u/ml，结晶温度28-31℃，结晶时间为60分钟，加碱后最终母液pH值控制在2.90-4.00范围内。

本纯化方法用水均为去离子水，符合美国药典23版纯水项下的要求。

本发明重要特点是提高了土霉素含量(≥98.5％)，降低了杂质吸收度(490nm＜0.02)，同时得到无菌、细菌内毒素符合要求的产品，按上述纯化方法，连续试制五批样品，分析数据如下：

注：杂质吸收度和含量按英国药典98版土霉素项下的方法检查和测定，无菌检查和细菌内毒素按美国药典23版及其增补项要求检查。

下列实例将进一步说明本发明。

实例1

工艺配方：无盐水                 800ml

          4M盐酸                 55ml

          浓磷酸                 7.0ml

          土霉素                 60g

          黄血盐钠               1.8g

          硫酸锌                 1.8g