[发明专利]工业循环冷却水中硝酸细菌的测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种工业循环冷却水中硝酸细菌的测定方法，属于生物细菌的定量检测方法。

背景技术：

工业循环冷却水系统本身就是一个良好的细菌生长的生态环境，为细菌的生长提供了空气、水分、温度和适宜的酸碱度。在密闭的循环冷却水系统中，一般均使用亚硝酸类的缓蚀剂，其亚硝酸根的浓度要保持在300～400mg/L。这为硝酸菌(NItrobacter)的生长提供了充分的无机盐养料。硝酸菌大量的繁殖，将形成生物污泥堆积在管道内，从而降低设备传热效率，并堵塞管道。同时由于细菌的生化作用，水中的亚硝酸根迅速地转化为硝酸根，不仅使缓蚀剂的浓度大大降低，而生成的大量硝酸为强酸物质，腐蚀设备。现有技术中因没有测定方法，只能用测定水中异氧菌数来代表细菌的总数，来评定水的质量。如中国专利ZL97112019.6公开的《快速测定循环水中含菌量的方法》，以TTC为染色剂，与由蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、蒸馏水配制成的染色培养基液，经组装试管后灭菌备用；再将定量的被测水移入备好的试管中封闭摇均后，置入恒温培养箱内培养，至试管内液体变为浅粉红色，按所培养时间得出单位容积被测水中含菌数。该方法操作简便、测定快速，但所测出的仍是水中异氧菌的总数。而硝酸细菌是一类化能自氧细菌，是与异氧菌生理代谢类型不同的细菌。因此只测定水中异氧菌数量，是无法正确判定有亚硝酸和氨类物质存在的水系统中细菌的总量，从而确定水的好坏程度的。在实际生产中，往往造成水系统中的药剂浓度反复波动，有时几天内亚硝酸根从正常的300～400mg/L降到检不出，而硝酸根从十几个mg/L上升到上千个mg/L，严重影响生产的正常进行。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能够简单、方便地对硝酸细菌进行定量检测的工业循环冷却水中硝酸细菌的测定方法，以便科学地进行水质管理，合理指导水中杀菌剂的投加，有效地控制细菌的生长，保证生产正常进行，同时也使得对杀菌剂的杀菌效率能够作出正确评价。

本发明的目的是通过以下措施实现的。

一种工业循环冷却水中硝酸细菌的测定方法，采用最大可能菌数计数法(MPN法)，其检测步骤如下：

1)制备培养基：用适量的亚硝酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、硫酸镁与蒸馏水配置成液体培养基，并用酸或碱调pH值至中性，定量分装于试管中灭菌后备用；

2)制备比色试剂：取冰醋酸50ml与900ml水混合，加入对氨基苯磺酸5.0克，盖塞摇均，加入盐酸萘乙二胺0.05克溶解后，用水稀释到1000ml制成比色试剂原液，再取3～5份比色剂原液和1份水混合均匀制成比色试剂；

3)水样采集与稀释：用无菌采样瓶采集被测水样，在无菌箱内以10倍稀释法做至少3个稀释度，应使最后一个稀释度接种培养后没有硝酸细菌生长；

4)接种：在前述装有培养基的灭过菌的试管中分别加入等量的不同稀释度的水样，每个稀释度做4～6个重复组，其中一组作为对照组，其余为检测组；

5)恒温培养：将上述检测组试管置于28～30℃恒温培养3～14天，同时将对照组试管置于4℃冰箱内保存相同的时间；

6)结果检查计数：从培养后的每个稀释度的每支检测组试管及对照组试管中分别取适量的培养液于比色管中，加入适量比例的比色试剂，10～20分钟后，将检测组发出的红色与对照组目测比较，红色较淡的比色管为阳性(+)，表示有硝酸细菌生长，与对照组红色一致的为阴性(-)，表示没有硝酸细菌生长，根据检查结果，得出阳性组合指数，用MPN法查表求出每毫升水样中硝酸细菌数。

制备培养基是按亚硝酸钠0.5克、碳酸钠1.0克、磷酸二氢钠0.25克、磷酸氢二钾0.75、硫酸镁0.03与蒸馏水1000毫升的比例配置成液体培养基，并用盐酸[1∶1]调pH值至7.0±0.2。

恒温培养中的检测组水样在培养至少3天后进行预检测，从一组每个稀释度的每支检测组试管及对照组试管中分别取适量的培养液于比色管中，加入适量比例的比色试剂，10～20分钟后，将检测组发出的红色与对照组目测比较，当目测结果具有为阳性(+)的检测组试管时，即可进行结果检查记数。